PEI 转染法

PEI 转染法材料：质粒DNA指数生长的真核细胞PEI （聚乙烯亚胺）1×HBS （pH7.4）配方：PEI 储存液（100 μM）：称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于4℃备用。1×HBS （pH7.4）： 将8.76 g NaCl 溶解于900 ml 超纯水，加入20 ml 1 M 的HEPES，调pH 值到7.4，定容至1 L，过滤（0.2 μm 滤膜）后储存于4℃备用。方法：1．细胞分盘： 通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105 至8×105细胞/cm2 的密度平铺细胞于60 mm 组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％ CO2 的37℃温箱中孵育8-24 h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2 mL 预热的无血清培养基。2. 制备PEI-DNA 混合物：以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准备两支1.5 mL 离心管，一管将质粒DNA（总量2-8 μg 为佳）加入240 μL HBS中，混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM，充分混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中，充分混匀后室温静置20-30 min。最后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％ CO2 的37℃ 温箱孵育。注：每次用100 μM 的PEI 储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。3. 培养6-10 h 后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16 h 左右可以观测到报告基因的表达。