求教:TwistDx美元价/进货价 TwistDx逆转录反应,哪里有卖?

TwistDx产品信息:

货号	品名	规格
TALQBAS01	TwistAmp Liquid Basic Kit	100 rxn以上
TALQBASRT01	TwistAmp Liquid Basic RT Kit	100 rxn以上
TALQEXO01	TwistAmp Liquid Exo Kit	100 rxn以上
TALQEXORT01	TwistAmp Liquid Exo RT Kit	100 rxn以上

附: TwistAmp liquid试剂盒Q&A

Q 20x核心反应mix有沉淀,是否影响其功能?

A在低温保存时, 重组酶和辅助蛋白在50%甘油中20x核心反应mix中有时会发生可逆的共沉淀反应.所以在室温融化混匀后离心使其返回溶液形式并不影响其功能。

Q 使用Liquid试剂盒做多重实验，能否制备master mix?

A 可以。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可以预先混合，置于冰上几个小时，在很多实例中可以过夜保存（性能上有任何改变都需要客户自行实验和评价）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。

Q 使用Liquid试剂盒如何提高重复率和RNA模板的扩增率?

A 先将RNA模板和醋酸镁混合后加入反应体系中，RNA的三级结构会抑制逆转录酶的活性，所以加入RNA和醋酸镁时，将两者分别加到在管内壁两侧或者将醋酸酶加在管内盖中，同时离心混入体系，这种操作会提高反应性能。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，还能使用吗?

A 可以。少量磷酸肌酸会发生沉淀不会影响RPA反应，只需在实验前通过涡旋将沉淀重悬离心即可。

Q 在使用Liquid试剂盒时，是否能够使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?

A 可以，请参考

http://dx.doi.org/10.7150/thno.15250 和 http://dx.doi.org/10.1186/s13148-015-0100-6

Q 最小的RPA液体反应体系是多少?

A 最小低至PL级，请参考

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0153359

Q 液体反应体系中需要加入多少dNTPs?

A 1.8mM(总)dNTPs 作为起始量即可。用户也可以根据自身实验优化浓度,有时1-12mM均适用。

Q 如何提高扩增曲线的可重复性?

A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。

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