杭州正品Emfret生物试剂1 Emfret 二抗

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jaq1-分析GPVI综合抗体
jaq1单克隆抗体与血小板胶原受体GPVI的反应。一方面，它能抑制胶原诱导的小鼠血小板聚集，而交联的jaq1次级抗体诱导的血小板活化和聚集。
jaq1可用于免疫沉淀法、丙酮固定的冰冻切片免疫组化分析，免疫荧光染色，而非还原条件下的免疫印迹分析。
小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析
-稀释或洗涤全血的制备
-洗涤小鼠血小板的制备
血小板表面糖蛋白表达的单色分析
血小板活化的双色分析
Immunohistochemistry（丙酮固定冰冻切片）
免疫共沉淀
免疫印迹（免疫印迹分析）
小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析
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缓冲液和试剂
Tris缓冲生理盐水/肝素（TBS/HEP）：20mm三/盐酸；氯化钠137毫米；pH值为7.3；含20U/mL肝素。
磷酸盐缓冲液（PBS）：氯化钠137毫米；2.7毫米；1.5毫米8毫米磷酸二氢钾；磷酸氢二钠；pH值为7.14。
台氏液（修改）：氯化钠134毫米；0.34毫米2.9毫米钠；碳酸氢钠；12毫米；20毫米hepes；pH值为7；5毫米葡萄糖；0.35%（W/V）牛血清白蛋白
Apyrase：10U／ml的股票在h2obidest（存储在20°C）
前列环素（前列腺素2，PGI2）：1毫米的股票在h2obidest（存储在20°C）
氯化钙：1米的股票在h2obidest
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稀释或洗涤全血的制备
50µL血液肝素化玻璃毛细管（例如ringcap）从眼眶后静脉注入1.5毫升管含有200µLTBS/肝素（20U/ml）。
在´稀流的缓冲区，使用流式细胞仪分析1毫升。
准备洗血，离心稀释血在900xg5分钟，去上清，悬浮颗粒在1.25mL灌流´缓冲。
在实验开始前直接添加1毫米氯化钙。
注意：对于凝血酶诱导的血小板活化，血浆必须除去，以防止凝血酶活性。
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洗涤小鼠血小板的制备
冲洗血小板的制备是一种耗费时间较多的方法，需要大量的血液，但产生的血小板制剂可以使用几个小时。
收集0.5-1毫升血液1.5厘米的玻璃毛细管从眼眶丛成1.5毫升管含有200µLTBS/肝素（20U/ml）。
离心样品5分钟，每次500克，然后将富含血小板的血浆（PRP）输送到新的试管中。为了获得最佳的血小板恢复，采取包括红细胞在内的全白相。
将血小板悬液离心8分钟，在300×g，然后把没有任何红细胞的PRP移植到新的试管中。
添加0.5µ前列环素（PGI2）和M1300xg离心5分钟。
血小板颗粒悬浮在1毫升Tyrode的缓冲液，加入0.02U/ml和0.5µapyraseM前列环素，孵育5min37°C，并在1300xg离心5min
重复步骤5和血小板颗粒悬浮在0.5毫升的台氏缓冲液，加入0.02U/毫升apyrase培育30分钟在37°C.
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血小板表面糖蛋白的单色分析
结合5µL的特异性或阴性对照抗体和25µl稀释整体或洗1-2秒，涡旋混合法管血。
孵育15分钟室温。
停止反应，400µLPBS和分析在30分钟之内。
样品孵育用FITC标记的IgG（黑线），抗GPVI、或抗GPV的描述。血小板门控正向（FSC）/侧散射（SSC）的特点。荧光1（FL1）的门控强度（R1）的血小板在单独的直方图显示。红细胞。
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血小板活化的双色分析
添加5µ具体的或负的检测管与5µl泛血小板标记抗体控制。
在这一点上，任何额外的试剂（如抑制剂）是在小体积的增加（＜5µL）。
添加26µl稀释整体或洗血或洗涤血小板（100万）和涡流混合1-2秒。
孵育15分钟室温。停止反应，400µLPBS和分析在30分钟之内。
洗涤后的小鼠血小板与PBS（静息）或凝血酶（0.1U/ml）结合FITC和PE共轭单克隆抗体孵育。血小板是由GPIX或GPIIbIIIa表达门控（FL1；门1）。
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Immunohistochemistry（丙酮固定冰冻切片）
请注意：不建议在（对-）甲醛固定样品上进行免疫染色，因为大多数鼠抗体在这些条件下对小鼠组织只产生很差的结果。
冰冻组织切片和幻灯片固定在冰冷的100%丙酮在4°C.干标本在晚上在RT.20分钟为了使试剂体积减到最小，可以用防水笔在幻灯片上的纸巾部分周围画一个疏水环。在所有后续程序中，这个环绕的区域不应该干涸。因此，建议在潮湿的盒子中进行孵化步骤。
在PBS孵育20min的幻灯片
当用过氧化物酶标记的二次抗体，室温孵育10分钟，用0.03%的H2O2抑制内源性过氧化物酶活性。在PBS中冲洗三次，每次洗涤5分钟。
幻灯片1小时孵化室温封闭解
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