基因敲除小鼠_图文

持续活化的Cre敲除基因的效率较高，但敲除基因的时间点不可控，导致基因敲除可能发生在发育早期或非预期的实验时间窗。诱导型CreER虽具有时间可控性，提高了遗传操作的精确度，但敲除基因效率较低。为了提高诱导型CreER的基因敲除效率，需要高剂量且多次给予tamoxifen诱导，这不仅对实验小鼠有毒副作用、长期影响其健康状况，而且会引起基因敲除以外的一些混淆的表型。Cre小鼠通常不需要纯合小鼠，通常杂合子的Cre小鼠表达量已经足够重组了。纯合子Cre插入位点不确定，可能导致非预期表型。Cre小鼠可能带有毒性，对内源基因表达有影响。Cre小鼠作用的时间点是不可控的，其剪切效率比Cre ER高。CreER会有leaky(泄露)的情况。CreER的结果直接取决于tamoxifen诱导时间窗口的基因表达的情况，他莫昔芬可以在胚胎期给药，可以穿过胎盘屏障。当然也有一种和谐的解决方法：例如2020年周斌组发表的Generation of a self-cleaved inducible Cre recombinase for efficient temporal genetic manipulation文章。该研究构建了一种新的诱导型Cre重组酶，可通过自我剪切将诱导型CreER转变成持续活化的Cre，实现时间可控的高效遗传操作。这种新型Cre重组酶结合了诱导型CreER和持续活化的Cre重组酶的优点，既提高了重组效率又具有时间可控性，弥补了传统CreER和Cre重组酶介导的遗传操作技术的缺陷，突破了长期阻碍基因功能研究的瓶颈，可广泛应用于器官发育、组织再生和疾病进程中的基因功能研究。生殖系统漏表达现象他莫昔芬的给药时间窗口，6-8天才会代谢，连续给药比较好雌激素诱导型 Cre-ER将雌激素受体（estrogen receptor，简称ER）的配体结合区与 Cre 重组酶相融合，形成定位于胞浆中的融合蛋白（Cre-ER）。这样就通过控制雌激素的注射时间，可以实现对基因重组时间特异性的调控。可是机体自身不是就有雌激素分泌吗？为了避免内源雌激素的干扰，在人ER的配体结合区做一个点突变（G521R）就可以使 Cre-ER 只响应外源的人工合成雌激素（比如：Tamoxifen、4-OHT）的诱导，命名为Cre-ERT。之后，另一种 LBD 突变体融合蛋白被证明对 4-OHT 具有远高于 Cre-ERT 的敏感性，这种突变体就是大名鼎鼎的Cre-ERT2啦。它带有人 ER LBD 中的3个点突变：C400V/M543A/L544A。Cre-ER 系统，特别是 Cre-ERT2 ，是目前应用最广泛的诱导型 Cre 系统。其较之四环素诱导型 Cre，系统更为简单。我们只需要将 Cre-ERT2 设计在组织特异性启动子之后，并与flox 小鼠交配，就可以通过在特定时间点给予Tamoxifen来最终实现对靶基因的时空特异性敲除啦。Transgenesis Techniques Principles and Protocols 》Third Edition图片来源 恭喜你成为个图VIP！ 在打印前，点击“下一步”观看2个提示下一步 全部 全站无广告全屏阅读全站电子书免费读VIP专属标识 微信支付查找“商户单号”方法： 1.打开微信app，点击消息列表中和“微信支付”的对话 2.找到扫码支付给360doc个人图书馆的账单，点击“查看账单详情” 3.在“账单详情”页，找到“商户单号” 4.将“商户单号”填入下方输入框，点击“恢复VIP特权”，等待系统校验完成即可。 支付宝查找“商户订单号”方法： 1.打开支付宝app，点击“我的”-“账单” 2.找到扫码支付给个人图书馆的账单，点击进入“账单详情”页 3.在“账单详情”页，找到“商家订单号” 4.将“商家订单号”填入下方输入框，点击“恢复VIP特权”，等待系统校验完成即可。 请通过以下步骤，尝试恢复VIP特权 第1步在下方输入你支付的微信“商户单号”或支付宝“商家订单号” 第2步点击“恢复VIP特权”，等待系统校验完成即可 如何查找商户单号？ 订单号过期！ 该订单于2020/09/09 23:59:59支付，VIP有效期：2020/09/09 23:59:59至2020/09/11 23:59:59！如需使用VIP功能，建议重新开通VIP 返回上一页