chromotek GFP和RFP常见问题解答_文档下载

ChromoTek 常见问题解答

1、GFP-Trap 可识别的GFP衍生物类型有哪些？

(1) eGFP, wtGFP, GFP S65T

(2) TagGFP

(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin

(4) CFP

不能识别：TurboGFP，所有的RFPs

2、RFP-Trap 可识别的RFP衍生物类型有哪些？

(1) mRFP

(2) mCherry

(3) mOrange

(4) mPlum

(5) mRuby

(6) mKate2

不能识别：DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有GFPs

3、Nano-Trap (GFP-Trap / RFP-Trap ) 的结合能力如何？

Nano-Trap 的结合能力取决于珠子。每10μL浆液，琼脂糖珠可结合2~3μg GFP，磁性颗粒可结合0.25-~0.5μg GFP。

4、可以从GFP-Trap洗脱结合蛋白么？

关于定量洗脱，可以将样品至于SDS上样缓冲液中95℃煮10min（详见protocol），或者在0.2 M的甘氨酸（pH2.5）中孵化0.5~2min，随后用0.1体积的1M Tris碱中和。

5、是否可以从GFP-Trap洗脱出自然状态的结合蛋白，比如，在凝胶迁移实验或功能分析实验中？ 可以尝试洗脱游离的GFP。但是，请注意，这种方法，不能定量洗脱出目标融合蛋白。

6、怎样才能避免非特异性的蛋白与GFP-Trap交互作用而结合？

关键操作步骤，是在孵化液中稀释洗涤剂的浓度。我们建议，洗涤剂为终浓度0.1%（如NP-40 或TX-100），且最终体积不少于0.4mL。另外，我们建议，要测定各种洗涤缓冲液的盐浓度，使其范围在150mM-500mM范围内，以去除非特异性结合的亲水性蛋白。

7、在binding过程中，N-端与C-端GFP融合蛋白之间是否存在差异？

GFP-Trap 对C-末端的GFP融合蛋白的亲和力稍高，若要消除这种差异，可以加长孵化时间（1-2h取代15-30min）

8、是否可以在组织样品（即变性缓冲液）中直接纯化GFP标记的融合蛋白？

原则上，GFP-Trap 即使在恶劣的缓冲条件下（如，RIPA缓冲液，含0.1%SDS或1M尿素），也非常

蛋白質純化與分析 Protein Purification and Analysis Chromotek 產品線 ? GFP-Trap? ? RFP-Trap? ? Booster ? Monoclonal-Ab ? Binding control 何謂 Chromobody...

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