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【求助】单抗药物的糖型分析

有没有做单抗药物糖型分析的同事呢?用NP-HPLC吗?标准品从哪儿里买?GO G0F, G1, G1F,

标品可以从prozyme购买,这家的糖生物块的产品还是蛮齐全的,2-ab的标记试剂盒也有的 做单抗糖型分析 单抗纯化后 用外切糖苷酶PNase切下糖链 用2-ab or 2-aa进行标记,再除去多余的标记,进行HPLC检测版主zhulikou431留言: 鼓励新手

测糖型分析,很多人也在用Ludger品牌的东西,还不错,用的PNG酶解,然后2AB标记,纯化后进行分析。有详细步骤,我找下发来给大家参考参考:-----------------------N-多糖分析第一步:释放多糖(用阱解释放试剂盒:LL-HYDRAZ-A2 用于从糖蛋白释放N-/O-多聚糖,4-10℃避光保存)E-PNG01糖基肽酶(N 糖苷肽酶F)多糖释放酶E-PNG05糖基肽酶(N 糖苷肽酶F)多糖释放酶------------------------------第二步:标记2-AB 多糖标记试剂盒LT-KAB-A22-AB染料标记多糖,室温避光储存 规格:1 kit containing2 Reaction Sets此外还有比较常用的升级版的,无毒2-AB多糖标记试剂盒,2PB 作为还原剂规格: 1 kit containing2 Reaction Sets优点:多糖可在两小时内标记于2AA 或2AB。这标记试剂盒采用一种无毒的还原试剂----2-甲基吡啶硼烷(2-PB),比之前有毒性的氰基氢硼化钠更安全。而这项技术Ludger 已获得独家专利。Ludger提供的无毒2AA(货号:LT-KAA-VP24)和2AB(货号:LT-KAB-VP24)多糖标记试剂盒具有以下特点:1、已通过ICH Q2(R1)认证,进行过β 因素测试2、精确度高,相对峰面积超过5%,其CVs 是少过5%;相对峰面积低于5%,其CVs 是少过8%;3、标记效果与现有有毒性的2-AA 标记试剂盒和2-AB 试剂盒相当;4、试剂盒含有两个预混合瓶,一瓶是醋酸和DMSO 溶液,另一瓶是有2-PB 的2-AB 或者2-AA 标记物,因此标记过程简单。5、2h 内完成标记。----------------------第三步:纯化S 多糖纯化柱 LC-S-A6【我们就是用的这款柱子进行纯化的,这个好像也是USP推荐的】用于从混合物中分离多糖成分,包括Ludger荧光和发色基团标记的多糖,纯化2-AB 标记的多糖的传统方法规格:6 units/packT1 多糖纯化柱(含真空多联支架)LC-T1-A6用于荧光和发色基团标记的多糖纯化,适合纯化2-AA和2-AB标记的多糖,用于真空歧管系统,同时可以处理多达96 个样本。规格:6 cartridges-----------------------------第四步:用HPLC,UHPLC或MALDI MS分析高分辨酰胺色谱柱 LS-N2-4.6x150规格:1 column 用于Ludger荧光和发色基团标记多糖的高效液相色谱分析。40 倍甲酸铵缓冲液,pH 4.4,LS-N-BUFFX40,规格:1 bottle, 50ml 用于酰胺或HILIC(亲水相互作用)的液相色谱分析C3高效液相色谱柱LS-C3-7.5x75 规格:1 column 用于带电荷多糖分析4 倍甲酸铵缓冲液, pH 9 LS-C-BUFFX4 规格:1 bottle, 50ml用于带电荷多糖分析多糖标准品(标记的/未标记的)-在HPLC或MALDI MS分析中用于参照糖蛋白或多糖文库-用于做标准品或对照品。【标准品比较齐全,G0,G1,G2, G1F,G2F,G0F都有,还有Man系列的,纯度很好】碳水化合物单糖:定量单糖标准品(6种单糖混合物:葡萄糖胺, 半乳糖胺, 半乳糖, 甘露糖,葡萄糖和岩藻糖))CM-MONOMIX-10定量唾液酸标准品(NouGc和NouAc):CM-NEU-GC-01N-羟乙酰神经氨酸定量标准品和CM-NEU-AC-01N-乙酰神经氨酸定量标准品 鉴定Nou5,9Ac2:CM-NEU5,9,AC-01梯度葡萄糖同聚物-用作系统适用性标准品和校准GU值。内切糖苷酶-和LS-N2高分辨酰胺色谱柱(用于Ludger荧光和发色基团标记多糖的高效液相色谱分析)一起用来测定具体结构序列。目前有国外的和国内的网站:www.ludger.com、www.ludgesh.com

一般是用糖肽酶PNGase F过夜切下来后,沉淀蛋白,上清液收获寡糖,使用HPLC(安捷伦应该就有)分析。看过一份资料,标准品是可以从Prozyme (Hayward,CA, USA)购买。


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