春季重点推荐：支原体预防和消除试剂DePlasma

支原体是实验室细胞培养过程中最常见、不易被察觉，却严重干扰实验结果的一种污染。各种研究表明，细胞库中支原体感染率达到10%-80%，目前发现的支原体已有数十种之多。支原体的预防，检测，及处理是实验室培养过程中最为头疼的事情。本文特别推荐TOKU-E公司的支原体预防和消除试剂——De-Plasma。

产品名称	De-Plasma™
产品编号	D022-250mg
包装规格	De-Plasma™：50mg/支×5
外观	米黄色粉末
保存温度	粉末：4°C
保存温度	溶液：4°C
有效期	粉末：1年
有效期	溶液：3个月
价格	250mg仅售1192.00元。

应用：

De-Plasma™用于消除各类培养细胞中的支原体污染，也可用于预防培养细胞的支原体污染。

描述：

De-Plasma™是大环内脂、喹诺酮、四环素化合物三种抗生素的混合物，与市场上其他同类产品相比，这3种成分的混合物几乎无细胞毒性，但是效价更高。能够有效的抑制所有已知的支原体种类和相关的无细胞壁原核生物。

作用方式：

De-Plasma™的每种抗生素的作用方式并不一样，四环素类和大环内酯类通过干扰在原核生物在核糖体上的转录而阻断蛋白的合成。喹诺酮类通过抑制细菌DNA旋转酶和拓扑异构酶IV阻断DNA的复制。由于真核生物无DNA旋转酶和拓扑异构酶IV，所以De-Plasma™不会对真核细胞产生影响。

使用方法：

De-Plasma™ 可以直接加到装有培养基的瓶子中或是装有细胞的培养瓶中。推荐将De-Plasma™配成1000x的储存液（或5mg/ml）：在50mg的小管中加1ml水，摇动之后转移到大于10ml的容器中，再加入9ml的水配置成浓度为5.0mg/ml的10ml储存液。储存液4度可以保存3个月。

De-Plasma™的工作浓度：5μg/ml

净化期：4代（根据细胞的生长状态大约需要2到3周）

细胞状态的维持和预防用量：2.5μg/ml。

注意事项：

为了提高De-Plasma™的有效性，我们建议：

l 使血清的浓度高于10%以提高细胞的生长率。

l 充分混匀培养基和De-Plasma™。

l 吹散细胞簇，防止细胞成团。

l 保证细胞密度比平时高5%到10%。

l 每天在倒置显微镜观察细胞状态。

原代细胞系实验步骤：

1、将细胞加入含有5μg/mlDe-Plasma™的培养基中。

2、用含5μg/ml的De-Plasma™的新鲜培养基传3代。对于某些生长较慢的细胞，建议2-3天更换一次培养基。

3、通过TOKU-E’sPCR支原体检测试剂盒来检测支原体的清除效果。

4、如果3代以后支原体还未消除，用含40μg/ml的De-Plasma™的培养基再进行一次传代培养。

5、再次用TOKU-E’sPCR支原体检测试剂盒验证支原体的去除情况。

根据对上百种细胞的应用测试显示，TOKU-E已被证明是对De-Plasma™A和B无抑制作用的。

无支原体污染的细胞可以加入2.5μg/ml的De-Plasma™用于预防：

实验步骤：

1、将细胞加入含有2.5μg/ml的De-Plasma™培养基中。

2、保证细胞在De-Plasma™存在下生长状态正常。

3、为了长期维持无支原体污染，建议持将细胞加入含有2.5μg/ml的De-Plasma™中培养。

4、通过TOKU-E’sPCR支原体检测试剂盒来验证支原体的清除效果。

技术特性：

无论是科学研究还是工业生产中，支原体污染都是细胞培养中一个主要的问题，据估计，超过80%的细胞系都可能被支原体污染。目前去除支原体的商业化抗生素有以下几种：BM-Cyclin(Roche)含有一种大环内脂类和一种四环素类抗生素；Ciprobay（Bayer，只做处方药提供）和MRA(ICN)均是喹诺酮类。然而，这3种商业化的支原体清除试剂都已超过15年，所以支原体已经对部分试剂产生了耐药性。

产品	供应商	作用时间	便利性	有效性	细胞毒性	耐药性
BM-Cyclin	Roche	3周	-	+++	+	+/-
Ciprobay	Bayer	12-20天	+	++	+/-	+
MRA	ICN	1-2周	+	++	+/-	+
De-Plasma™A	TOKU-E	1-2周	+	+++++	-	-
De-Plasma™AandB	TOKU-E	2-3周	-	++++++	-	-

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