反转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReactionRT-PCR)是一项有效的和广泛使用的研究工具,它可以用于多种应用,包括RNA检测、基因定量以及克隆。随着这项技术的逐渐普及,针对提高速度、方便性和多用途性的革新方案的需求,也变得越来越迫切。作为反转录的领先者,Invitrogen不断地推出满足这些需求的、新颖的、高性能的解决方案,以提供快速的CDNA合成,方便的冻干试剂RT,直接从细胞进行高产量的cDNA合成,高保真的克隆的RT-PCR以及对困难RNA模板进行更加成功的RT-PCR。
Invitrogen性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术,包括SuperScript™IIIRT和最新推出的Thermo-X™RT。SuperScript™IIIRT是M-MLVRT基因工程升级版本,减少了RNaseH活性,提供更高的热稳定性(1-3)。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA,比以前使用的反转录酶提供更高的特异性,更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™RT克隆自一种嗜热真细菌,提供高达70℃的热稳定性,因而即使是最具挑战性的模板也可以进行有效的RT-PCR.。
通过SuperMix形式快速合成cDNA
SuperScript™IIIFirst—StrandSynthesisSuperMix将所有进行强大的、灵敏的第一链cDNA合成所必须的组分组合成快速、易于使用的SuperMix形式。SuperMix形式包含2xRT缓冲反应混合物、dNTPs、MgCl2、以及由SuperScript™IIIRT和RNaseOUT™.组成的酶混合物。也提供优化的退火缓冲液以提高反应灵敏度和产量。性能卓越的混合物能够从低至0.1pg的总RNA中检测到看家基因(图1)和从长达12kb的靶标中高产量地合成cDNA,以进行多种RT-PCR应用,包括基因检测和全长基因克隆。
图1-SuperScript™IIIFirst--StrandSynthesisSuperMix提供卓越的灵敏度
使用SuperScript™IIIFirst--StrandSynthesisSuperMix,0.1pg到100pg的总HeLaRNA,和如图所示的看家基因引物对在50℃进行cDNA反应。使用Platinum®PCRSuperMix.以1min/kb进行PCR反应。使用SuperScript™IIIFirst-StrandSynthesisSystem进行RT-PCR合成cDNA作为对照反应。
方便的室温稳定(RoomTemperatureStableRTS)试剂
SuperScript™IIIRTS(室温稳定RoomTemperatureStable)试剂整合了您需要的一切,以方便的、一次使用的冻干分装形式提供高产量第一链cDNA合成。使用专利的冻干程序,在有冷冻保护剂存在的情况下,预混合、分装和冻干每个系统的组分。提供在室温下长达一年的稳定,同时确保酶活性的最大恢复。再次悬浮快速而简单:简单地加入引物和模板,再次悬浮反应混合物,短时vortex振荡混匀,就可以进行合成了。
SuperScript™IIIRTS第一链cDNA合成系统
这个系统包含进行第一链cDNA合成所需要的所有组分。可以用来从低至0.1pg的总RNA中检测看家基因(housekeepinggenes)(见图2),以及通过RT-PCR从长达12kb的靶标中合成高产量的cDNA。
在室温度下运输、贮存和组合反应混合物,使得这个RTS试剂盒成为进行多种RT-PCR应用的理想选择。
图2-SuperScript™IIIRTSFirst-StrandSynthesisSystem以方便的形式提供高灵敏度
使用SuperScript™IIIRTSFirst-StrandSynthesisSystem,0.1pg到100pg的总HeLaRNA和和如图所示的看家基因引物对在50℃进行cDNA合成反应。使用Platinum®PCRSuperMix.以1min/kb进行PCR反应。使用SuperScript™IIIFirst-StrandSynthesisSystem进行RT-PCR合成cDNA作为对照反应。