荧光定量PCR试剂系列之三：TaqMan Assay常见问题解答

Q24、TaqManMutationDetectionAssays有何用途？

A: 该产品采用castPCR技术（Competitive Allele-Specific TaqManPCR，竞争性等位基因特异TaqManPCR）。利用经过修饰的等位基因特异性的引物进行突变基因型的检测，同时采用MGB阻断物抑制野生型基因背景。该技术具有高度的特异性，可从大量正常拷贝的背景中检测出极微量突变。

Q25、TaqManMutationDetectionAssays应该配套哪种mastermix?

A: 推荐使用TaqManGenotypingMasterMix，其他类型的mastermix未经过测试。

Q26、TaqManMutationDetectionAssays适用于哪些样品类型，对样品起始量有何要求？

A: 样品类型以及起始量要求参看如下：

Q27、TaqManMutationDetectionAssays产品适用于哪些型号的定量PCR仪？是否适用于其他品牌的仪器？ 

A: 

QuantStudio3,5,6,7也可以使用。

由于后续数据分析需要使用专门软件，我们不建议在其他仪器上使用。

Q28、TaqManMutationDetectionAssays反应次数是多少？

A: 该类型Assays仅有一种包装。针对384孔板10微升体系时，每孔需加Assay1微升，可以作150次反应；针对96/Fast96孔板20微升体系时，每孔需加Assay2微升，可以作75次反应。

Q29、TaqManMutationDetectionAssays的数据如何分析？

A: 如果使用AB品牌定量PCR仪器，数据分析可以使用MutationDetectorSoftware，下载网址：https://www.Thermofisher.com/cn/zh/home/technical-resources/software-downloads/mutation-detector-software.html

Q30、TaqManMutationDetectionAssays产品该如何选择对照？

A: 可以在AssaySearch界面中点击“Requiredreferenceassays”进行选择，如下图。

针对部分基因和位点，我们同时提供wildtypeassay和genereferenceassay，两者均可以作为对照使用，优先推荐wildtypeassay。而对于没有提供wildtypeassay的基因和位点，可以选择genereferenceassay作为对照。

Q31、Genereferenceassay和IPC有什么区别？如何使用？

A: Genereferenceassay(FAM-MGB标记)扩增该基因的非突变区域，以计算突变比例，并排除模板问题造成的无法扩增，与MutationDetectionAssay同时反应，但加在不同反应孔中；IPC(VIC-TAMRA标记)是一个阳性内对照，能与任何MutationDetectionAssay产生阳性结果，用以区分阴性结果和PCR失败，与MutationDetectionAssay加在同一反应孔中。

Q32、使用TaqManMutationDetectionAssays进行实验时，应选择何种实验反应类型？

A: 选择AbsoluteQuantitationorQuantitation–StandardCurve。