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Exosome研究专题Exosome Research
Exosome是由多种活细胞分泌的50-100nm的膜性小囊泡，来源于晚期核内体（也成为多囊泡体）的囊泡，是由细胞内多泡体（MVBs）出芽形成，再与细胞膜融合后释放到细胞外基质中。几乎所有类型的细胞都能分泌，广泛存在于各种体液中。不同细胞来源的Exosome所含有的具体成分不尽相同，根据分泌的细胞类型不同，在血液、尿液、羊水、恶性肿瘤、腹水等动物体液中的Exosome通常含有特定的miRNA和蛋白质，因此，Exosome为研究潜在的各种bioMarker提供了很好的生物学材料。
     Exosome参与调控重要的细胞生理活动，在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道，可以成为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。作为囊泡的一种，Exosome受到越来越多的关注。2013年诺贝尔奖揭晓，美国、德国3位科学家JamesE.Rothman,RandyW.Schekman和ThomasC.Sudhof因“发现细胞内的主要运输系统-囊泡运输的调节机制”，荣获2013年诺贝尔生理学或医学奖。这一奖项的授予，无疑将囊泡的研究推向了新的高潮。
 

一、Exosome抽提
SBI公司研究和开发了一款基于多聚体形式的Exosome提取试剂，能够快速有效地提取及分离血清和肿瘤组织样本中的Exosome囊泡。这些多聚体能够形成类似于网状结构，从而将60-180nm直径的微泡分离出来。其纯度和产量皆优于上述传统方法。
（一）基于血清和血浆样本
 
 
货号产品规格价格（元）
EXOQ5A-1ExoQuickexosomeprecipitationsolution5ml(75T)4203.2
EXOQ20A-1ExoQuickexosomeprecipitationsolution20ml(300T)13561
 

    （二）基于细胞培养上清、组织、尿液样本

    货号产品规格价格（元）
    EXOTC10A-1ExoQuickTCexosomeprecipitationsolution10ml(10T)4189
    EXOTC50A-1ExoQuickTCexosomeprecipitationsolution50ml(50T)14072

    注：常温或蓝冰运输。
    产品操作步骤（仅作参考，以说明书为准）
    1.收集生物液体，并于3000g离心15分钟去除细胞或细胞碎片；
    2.将上清转移至另一干净的灭菌管中，加入适量的ExoQuickTC试剂（体积配比见下表）；

    孵育时间样本样本体积ExoQuickTC体积
    过夜（12小时）尿液5ml1ml
    4℃过夜（12小时）细胞培养上清5ml1ml

    3.上下颠倒离心管，混匀；
    4.4℃孵育过夜（至少12小时）；
    5.室温或4℃1500g离心30min，管底可见沉淀；
    6.去除上清；
    7.1500g继续离心5min，小心去除上层的液体组分；
    8.用100-500ulbuffer重悬沉淀（所用buffer根据下游的蛋白分析或RNA分析来定）。
    （三）Exosome抽提辅助试剂
    1.ExoQuick-LP脂蛋白预处理试剂盒
    人类血浆包含着一些微球、外泌体、凋亡小体和脂蛋白颗粒的混合物，为了研究血清或血浆中的exosome所包含的miRNA和蛋白，必须在提取exosome之前尽量去除其它一些颗粒，特别是脂蛋白颗粒。最新的研究表明，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中均包含有miRNA。为了避免在对exosome中miRNA研究中引起假阳性结果，必须尽量去除血清或血浆中的脂蛋白。SBI为您提供ExoQuick-LP试剂盒，有效去除样本中的脂蛋白，并高效提取血清或血浆中的Exosome。

    货号产品规格价格（元）
    EXOLP5A-1ExoQuick-LPLipoproteinPreClear&ExosomePrecipitationKit10T5751

    运输和保存
    ExoQuick-LP试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。
    2.凝血酶素D试剂
    为了避免血浆中的纤维蛋白造成exosome提取过程中的沉淀，因此要用凝血酶素D试剂预先去除血浆中的纤维蛋白，从而便于exosome的提取与研究。

    货号产品规格价格（元）
    TMEXO-1ThrombinPlasmaprepforExosomePrecipitation100T6347.4
    EXOQ5TM-1ExoQuickPlasmaprepandExosomePrecipitationKit75T9471.4

    运输与保存
    TMEXO-1试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。

    二、Exosome免疫纯化与分选

    （一）FACS磁珠分选Exosomes
             由于Exosomes体积太小而无法直接用于流式细胞分析，SBI为您推荐Exo-Flow抗体磁珠试剂盒，该试剂盒能够捕获Exosome特定的表面标记蛋白，利用流式分选技术，从而分离出不同亚型的Exosome。
          试剂盒中提供的9.1μM直径的Exo-Flow磁珠与传统的4μMDynabeads磁珠相比，能够更好地捕获Exosome，特别适用于数量较少的Exosome样本。
    常见的Exosome表面marker

    MarkerTypeFunctionsExamples
    TetraspaninsExosomeformationandsecretionCD9,CD63,CD81
    Targeting/AdhesionExosomematurationandtargetcellbindingIntegrins,ICAM-1,CD31,CD44
    AntigenPresentationImmunemodulation,anergyandprimingMHCI/II,HLA-G
    MembranetransportandfusionExosomebiogenesis,secretionanddownstreamcellfusionSNAP,Annexins,Rab5b
    •  
    • 产品信息
      货号名称规格价格（元）
      EXOFLOW100A-1CD9Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD9-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW150A-1TetraspaninExo-Flowcombocapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD9,CD63,andCD81-biotincaptureantibodies,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions8718.8
      EXOFLOW200A-1CD31Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD31-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW210A-1CD44Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD44-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW300A-1CD63Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD63-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW400A-1CD81Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD81-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW500A-1Rab5bExo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,Rab5b-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW600A-1HLA-GExo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,HLA-G-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW610A-1CD14Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD14-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW620A-1CD68Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,CD68-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW630A-1EpCAMExo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,EpCAM-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW650A-1Alpha-2-Macroglobulin(A2M)Exo-Flowcapturekit(Magneticstreptavidinbeads,A2M-biotincaptureantibody,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)10reactions5736.8
      EXOFLOW700A-1Exo-FlowMultifunctionalMagneticStand1Kit3947.6
      EXOFLOW800A-1Exo-FITCExosomeFACSstain20reactions2158.4
      EXOFLOW810A-1Exo-APCExosomeFACSstain20reactions2158.4
      CSFLOWBASICA-1BasicExo-Flowkitwithoutanycoupledantibodies(Uncoupledmagneticstreptavidinbeads,WashandElutionBuffers,Exo-FITCstain)100reactions9869
      （二）IP高通量沉淀血清Exosomes
      Exo-Flow96/32IP试剂盒可从血浆样本、使用ExoQuick-TC或超速离心富集的细胞培养上清（尿液、脑脊髓液等）exosomes产物样本中高通量、直接免疫沉淀exosomes。
      试剂盒中的磁珠已经预结合了CD9、CD63或者CD81用于选择性捕获特定的exosomes亚型，直接将上述样本添加入磁珠中即可免疫沉淀exosomes。96孔板或32孔板形式产品可用于同时处理多个样本。得到exosomes具有完整形态，可用于下游exosomesRNA和蛋白分析。
      三、Exosome验证分析
      SBIExoELISA产品线提供exosome常见的标记蛋白CD63、CD9、CD81和Hsp70抗体，这4种抗体也可以以试剂盒的形式提供（Westernblotsamplerkit(Catalog#EXOAB-KIT-1)）和ELISA试剂盒。
      （一）Exosome抗体（WesternBlot分析）
      货号产品名称规格价格（元）
      EXOAB-CD63A-1Anti-CD63Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat,horse)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-CD81A-1Anti-CD81Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-CD9A-1Anti-CD9Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-Hsp70A-1Anti-Hsp70Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-CETP-1Anti-CETPAntibody(polyclonalrabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-KIT-1ExoAbAntibodyKit(CD9,CD63,CD81,Hsp70antibodies,rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25uleach6475.2
      EXOAB-FLOT1-1Anti-FLOT1Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-EPCAM1-1Anti-EpCamAntibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-TSG101-1Anti-TSG101Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-CXCR4-1Anti-CXCR4Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-VMTN-1Anti-VimentinAntibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-ALIX-1Anti-ALIXAntibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      EXOAB-ANXA5-1Anti-ANXA5Antibody(rabbitanti-human,mouse,rat)withgoatanti-rabbitHRPsecondaryantibody25ul1902.8
      Exosome抗体运输与保存：蓝冰运输，收到产品后4℃保存，长期保存可置于-20℃.收到产品后有效期为6个月以上。
      （二）ELISA定量分析
      货号产品名称规格价格（元）
      EXOEL-CD63A-1ExosomeELISACompleteKit(CD63detection)96reactions8378
      EXOEL-CD81A-1ExosomeELISACompleteKit(CD81detection)96reactions8378
      EXOEL-CD9A-1ExosomeELISACompleteKit(CD9detection)96reactions8378
      EXOCET96A-1EXOCETExosomeQuantitationKit96reactions5609
      EXOAB-POS-1HumanExosomelysatepositiveproteincontrol(10ug/ul)50ul3436.4
      EXOEL-BB-20ExosomebindingbufferforELISAs20ml1902.8

    • 运输与保存：试剂盒由蓝冰运输，4℃保存，其中，ExoELISA蛋白标准品需保存在-20℃，建议蛋白样本分装，以避免反复冻融。有效期为收到产品后6个月。
      四、Exosome功能研究
      （一）荧光标记ExosomeSBI新产品Exo-Glow试剂盒，能够荧光标记内源的ExosomeRNAs为红色，标记内部Exosome蛋白为绿色，从而达到使用荧光显微镜实时追踪Exosome细胞内相互作用和物质运输。
      货号产品名称规格价格
      EXOR100A-1Exo-RedexosomeRNAfluorescentlabel20rxns4047
      EXOG200A-1Exo-Greenexosomeproteinfluorescentlabel20rxns4047
      EXOC300A-1Exo-Red+Exo-GreenexosomecargofluorescentlabelComboPack(10rxnsofeachlabel)20rxns4615
    • （二）利用Cyto-Trace让细胞分泌带有荧光的Exosome
      四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81蛋白为Exosomes常见的生物标记蛋白。通过CD63和CD9Cyto-Trace质粒，可以让您研究的靶细胞分泌带有绿色或者红色荧光的Exosomes，以便下游功能性运输研究。
      货号产品名称规格价格
      CYTO120-PA-1pCT-CD63-GFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD63TetraspaninTag)10ug7540.2
      CYTO120R-PA-1pCT-CD63-RFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD63TetraspaninTag)10ug7540.2
      CYTO122-PA-1pCT-CD9-GFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD9TetraspaninTag)10ug7540.2
      CYTO123-PA-1pCT-CD9-RFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD9TetraspaninTag)10ug7540.2
      CYTO124-PA-1pCT-CD81-GFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD81TetraspaninTag)10ug7540.2
      CYTO125-PA-1pCT-CD81-RFP(pCMV,Exosome/Secretory,CD81TetraspaninTag)10ug7540.2
      （三）Exosome转染试剂
      新型核酸转染试剂Exo-Fect，可以将核酸直接转染至分离得到的Exosome中。转染的si/miRNA，mRNA，甚至质粒DNA，可以通过转染的Exosome进入靶细胞。
      只需要将目的核酸与Exo-Fect转染试剂、分离到的Exosome简单混合，就能形成Exosome核酸运载复合体。整个转染过程检测，不到1小时即可完成核酸高效转染入Exosome过程。
      货号产品名称规格价格
      EXFT10A-1Exo-FectExosomeTransfectionKit10reactions2769
      EXFT20A-1Exo-FectExosomeTransfectionKit20reactions4970
       
      五、ExosomeRNA全面研究
      ExosomeRNA提取试剂盒专为exosomeRNA抽提设计，完美的富集microRNA和其他小片段RNA。分别针对血液样本和体液样本设计两款RNA提取试剂盒，特异性更高，适用所有类型细胞分泌的，以及任何分离方法得到的exosomeRNA提取。操作简单、方便，1h完成血清exosomeRNA提取，无需苯酚/氯仿抽提。
      纯化的exosomeRNA可以做进一步的microRNA筛选、芯片或二代测序等下游分析。但是由于exosomeRNA含量总体水平偏低，因此需在进行下游分析之前进行exosomeRNA的预扩增。
      货号产品名称规格价格
      RA800A-1CompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationkit(5mlExoQuick,20exoRNAcolumns,CDNAsynthesisandamplificationcomponents)20reactions10280.8
      RA800TC-1CompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationkitfromMediaandUrine(10mlExoQuick-TC,10exoRNAcolumns,cDNAsynthesisandamplificationcomponents)10preps7227.8
      RA806TC-1SeraMirExosomeRNAPurificationonlykitforMediaandUrine(10mlExoQuick-TCand10exoRNAcolumns)10preps6006.6
      RA808A-1SeraMirExosomeRNAPurificationColumnkit(20exoRNAcolumns)20preps4189
      RA810A-1HumanSeraMirExosomeRNA384microRNAqPCRProfilerAssaySet20profiles14824.8
      RA820A-1HumanCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKit(containscat#RA800A-1,RA805A-1,RA810A-1components)20profiles14824.8
      RA820TC-1HumanCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKitforMediaandUrine(containscat#RA800TC-1with50mlExoQuick-TC,RA805A-1andRA810A-1components)20profiles18644.6
      RA811A-1MouseSeraMirExosomeRNA384microRNAqPCRProfilerAssaySet20profiles5708.4
      RA821A-1MouseCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKit(containscat#RA800A-1,RA805A-1,RA811A-1components)20profiles14824.8
      RA821TC-1MouseCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKitforMediaandUrine(containscat#RA800TC-1with50mlExoQuick-TC,RA805A-1andRA811A-1components)20profiles18644.6
      RA812A-1RatSeraMirExosomeRNA384microRNAqPCRProfilerAssaySet20profiles5708.4
      RA822A-1RatCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKit(containscat#RA800A-1,RA805A-1,RA812A-1components)20profiles14824.8
      RA822TC-1RatCompleteSeraMirExosomeRNAAmplificationandProfilingKitforMediaandUrine(containscat#RA800A-1,RA805A-1,RA812A-1andEXOTC50A-1components)20profiles20profiles18644.6
      RA805A-1SeraMirControlspike-inSmallRNAandqPCRassay100assays2215.2
      RA800P-3SeraMir3"-UniversalPrimerbonuspack(foranadditional10,000qPCRreactions)1.2ml1533.6
           
       
      品牌介绍
      美国SBI（Systembiosciences）公司由前Clontech公司的创始人Dr.KenFong所创立。SBI一直致力为生命科学前沿领域提供各种最新的研究工具和产品。SystemBiosciences(SBI)致力于开发独特、革新的技术，为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具。SBI又称为“慢病毒公司”，提供各种基于慢病毒的所有产品，包括慢病毒的包装系统，病毒浓缩液，shRNA和microRNA功能研究的慢病毒载体，文库和高滴度的病毒，同时还提供各种基于慢病毒的延伸产品，在干细胞研究领域提供诸如iPS细胞，高效的iPS诱导系统还有检测iPS细胞分化的实时监测系统。SBI同时秉承Clontech在分子克隆领域的成功经验，推出了一系列的高效克隆工具，如革命性的高效无酶连接系统（Cold-fusionKit），真正做到了5min连接外源基因到载体。    
          同时SBI还是一家在全球范围内很有名的服务公司，曾为多家知名企业和科研院所提供各种病毒构建，和干细胞服务等。
       
      上海前尘生物科技有限公司www.qcbio.com  4006-111-883
       

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