大鼠肝脏过氧化物的测定

大鼠肝脏过氧化物的测定 【目的】1、学习测定过氧化脂质的实验方法 2、观察药物的抗氧化作用 【原理】自由基可使脂类形成过氧化物。过氧化脂质的二级分解产物为丙二醛，它与硫代巴比妥酸反应生成粉红色化合物，可以通过比色的方法对其浓度进行测定。又因四乙氧基丙烷在上述反应的同一条件下也能生成丙二醛，因此用四乙氧基丙烷为标准物质。 【材料】1、动物：大鼠，体重250～300g，雌雄均可 2、器材：恒温振荡器、离心机、组织匀浆机、722分光光度计、恒温箱、定量移液管、离心试管、试管、烧杯、天平、鼠笼、注射器、记号笔 3、药品：0.2g/ml三氯乙酸、6.7mg/ml硫代巴比妥酸、四乙氧基丙烷、生理盐水 【方法】1、制备肝匀浆：取大鼠称重后断头处死，取出肝脏，用滤纸吸去残血，剪成小碎块，称取5g，加生理盐水至100ml，用组织匀浆机匀浆（8000～10000r/min）。 2、测定过氧化脂质：将离心试管编号，取新鲜大鼠肝匀浆（50mg/ml）1.5ml分别加入离心试管中。实验管中加入待测药物0.1ml，对照管中加入生理盐水0.1ml，于37C°振荡温育1.5h，取出后加入1.5ml三氯醋酸。另外设空白对照管，温育前加入1.5ml三氯醋酸，同上述两种实验管同样温育振荡（此管作为比色计调零时使用）。混匀后静置10min，3000r/min离心10min。取上清液1.5ml，加1ml硫代巴比妥酸，沸水浴加热10min，冷却后在722分光光度计532nm波长处比色测定。 3、在四乙氧基丙烷标准工作曲线上检出与检品相应的nmol/L再乘以68.89，即为nmol/g湿重组织的过氧化脂质含量。 【结果】全班结果汇总，进行t检验。