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SBI无外泌体胎牛血清 SBI RNA干扰

SystemBiosciencesX品牌历史介绍:苏州蚂蚁淘生物科技有限公司,作为一家生命科学领域的高科技生物公司,目前代理销售二十多家欧美著名生物技术公司的产品,覆盖了免疫学、细胞生物学、分子生物学、药物筛选、生物制药、食品检测、疫苗生产等领域。


SBIExoQuickPLUS系列
高纯度Exosome分离—满足敏感下游实验
ExoQuickPLUS和ExoQuick-TCPLUS试剂盒中包含ExoQuick或ExoQuick-TC,以及可直接使用的预包被特制微珠。在使用ExoQuick系列试剂提取出外泌体沉淀后,仅再需10分钟操作,即可获得高纯度的完整活性exosomes。
产品特色
Cleaner—与柱式法血清外泌体提取试剂盒相比,最多可减少85%的血清白蛋白和免疫球蛋白
Better—与柱式法或试剂沉淀法相比,最多可减少50%的杂蛋白残留
Powerful—最多可3倍提高bioMarker检测效率
Fast—在ExoQuick试剂提取后,仅需10分钟手动操作即可

试剂盒组分

ExoQuickPLUS 试剂盒


ExoQuickReagent

2mL

ExoQuickPLUSMicrosphereBeads

10units

ResUSPensionBuffer

15mL

注:试剂盒中 ExoQuickPLUSMicrosphereBeads,每个单位基于 250μL血清样本。如果是血浆样本,则需另外购买凝血酶素(货号 TMEXO-1)预处理后,再搭配此试剂盒使用。

 

ExoQuick-TCPLUS 试剂盒


ExoQuick-TCReagent

10mL

ExoQuickPLUSMicrospherebeads

10units

ResuspensionBuffer

15mL

注:试剂盒中 ExoQuickPLUSMicrosphereBeads,每个单位基于适 5mL细胞培养样本。


产品信息

货号

产品描述

规格

说明

PM-EQPL10A-1

ExoQuickPLUSExosomePurificationKit

10rxns

以 250uL 血清起始样本为 次反应血浆样本,需要另外购买凝血酶素(货号 TMEXO-1)处理后,再用此试剂盒提取。

PM-EQPL10TC-1

ExoQuick-TCPLUSExosomePurificationKit

10rxns

以 5mL 细胞培养上清为 次反应

 



你研究牛的外泌体吗?如果没有,并且您在细胞或组织培养基中使用胎牛血清(FBS),则分离出的牛外泌体可能比您想象的要多。血清是外泌体的丰富来源,包括胎牛血清。为了帮助科学家仅研究他们想要的外泌体,SBI提供了Exo-FBS?外来体耗尽的胎牛血清。

  • 外泌体大小的囊泡被去除

  • CD63阳性奶牛外泌体水平非常低

  • 不可检测的牛microRNA水平

  • 与标准FBS相当的增长率

  • 与标准FBS相同(在DMEM或RPMI中添加10%)

   


背景

用于培养中大多数细胞的标准生长培养基需要FBS作为DMEM的生长补充。FBS来自牛(牛)血清,并且含有大量的牛外泌小泡。在标准培养条件下研究目标细胞分泌的外泌体时,这些外泌体可能会干扰或引起重大的背景问题。
SBI已开发出一种名为Exo-FBS的外泌体贫乏FBS生长补充剂,该补充剂已被剥离出牛外泌体。Exo-FBS支持培养中多种细胞的等价生长,不含牛CD63阳性外泌体,并且没有任何可测量的牛microRNA。Exo-FBS中的细胞生长与标准FBS相当。Exo-FBS的制造方法是专利号为:US9,005,888B2的专利方法。

结论

进行培养中细胞分泌的外泌体的研究时,无需担心实验中会污染牛的外泌体,并且使用ExoQuick-TC时无需超速离心。可作为标准FBS补充剂或热灭活的FBS培养基补充剂(在牛外泌体去除前于65°C处理15分钟)。

Exo-FBS大大降低了牛外泌体的水平

   

使用SBI的Exo-FBS确保来自细胞或组织培养基的外泌体制剂仅包含来自细胞的外泌体,而不包含来自培养基中FBS的外泌体。ELISA和NanoSight分析均表明,与标准FBS相比,Exo-FBS中的牛外泌体水平大大降低。

NanoSight颗粒分析显示Exo-FBS中的外泌体水平较低

为了证明我们Exo-FBS产品中外来体的消耗,我们将标准FBS和Exo-FBS样品按1:1000进行了稀释,然后使用NanoSightLM10仪器分析了粒径和丰度。标准FBS样品显示出大量的外泌体大小的微泡,其中Exo-FBS去除了外泌体的FBS样品显着减少了外泌体颗粒。

Exo-FBS耗尽了牛CD63外泌体

   

四跨膜蛋白CD63蛋白是外泌体的常见标记。我们利用牛特异性抗CD63抗体开发了一种酶联免疫吸附测定(ELISA)。在该ELISA分析中使用等体积(50μl)的标准FBS或Exo-FBS耗尽培养基补充剂。与标准FBS相比,Exo-FBS中CD63阳性牛外泌体的数量大大减少(绘制的结果已标准化为标准FBS的信号水平)。

  

  

Exo-FBS比超离心FBS干净

Exo-FBS比UC FBS更清洁

通过将NanoSight颗粒计数分析与原始FBS,超离心18小时的FBS以及SBI消耗了外泌体的Exo-FBS产品进行比较,可以对SBI生产的每批Exo-FBS生成质量控制数据。所有样品均按1:100稀释,一式三份收集NTA数据。

结论

使用Exo-FBS,您可以确信所分离的外泌体是由培养中的细胞产生的,而不是来自培养基的污染物。

Exo-FBS具有无法检测到的牛microRNA水平

Exo-FBS不仅大大降低了外泌体的水平,而且高灵敏度qPCR分析也显示出Exo-FBS中的牛microRNA无法检测到。用Trizol提取方法处理标准FBS和Exo-FBS培养基补充剂(4ml),以回收外泌体RNA。将RNA转换为CDNA,并使用SBI的QuantiMir系统通过qPCR测量72个单独的牛microRNA。在测试的72个microRNA中,有12条在FBS样品中产生了扩增曲线,而在Exo-FBS样品中没有。

Exo-FBS与用于细胞生长的标准FBS相同

Exo-FBS不仅可以可靠地分离不含标准FBS中存在的污染物的外泌体,而且还支持与标准FBS相同的生长速率。  
为了比较Exo-FBS与标准FBS中细胞的生长速率,我们在含有10%标准FBS或10%Exo的完全培养基中培养了HT1080纤维肉瘤细胞,PC-3前列腺癌细胞,MCF-7乳腺癌细胞和HEK293细胞。-FBS补充。将细胞接种在10,000或20,000个细胞中,然后在标准条件下于37°C在5%CO2中于指定培养基中培养5天。对细胞成像以计算生长速率并观察细胞形态。对于在这4种细胞系中测试的标准FBS和Exo-FBS培养基,观察到了同等的生长和类似的细胞形态。


目的探讨外泌体源性微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)对N9型小胶质细胞介导的炎症反应的作用和机制。方法利用装载有miR-146a的质粒转染人胚肾293(humanembryonickidney293,HEK293)细胞。然后应用SBI(systembiosciences)试剂盒提取外泌体,通过电镜观察和蛋白印迹法(WesternBlot,WB)鉴定外泌体。将外泌体加入N9型小胶质细胞培养皿内,用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导炎症反应后利用聚合酶链法(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测N9型小胶质细胞内miR-146a的含量,用RT-PCR和WB法检测Toll样受体4(tolllikereceptor4,TLR4)信号通路上肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumornecrosisfactorreceptor-associatedfactor6,TRAF6)和白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1receptor-associatedkinase1,IRAK1)的表达水平,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测与神经炎症相关因子干扰素β(interferon-β,IFN-β)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)的表达水平。结果通过质粒转染和SBI试剂盒成功获取了内含有miR-146a的外泌体,应用该外泌体干预N9型小胶质细胞后可以提高miR-146a的含量。与单纯采用LPS刺激相比,用内含miR-146a的外泌体干预后再接受LPS刺激作用可明显降低IFN-β、TNF-α、IL-1β和IL-1的表达水平,同时明显降低细胞内TRAF6分子的mRNA和蛋白表达,而对IRAK1的表达没有影响。结论外泌体源性miR-146a提高了N9型小胶质细胞内MiR-146a的表达量,并通过调控TLR4信号通路中TRAF6分子的表达负反馈抑制N9型小胶质细胞介导的炎性反应。

苏州蚂蚁淘生物科技有限公司成立于2017年,是一家专业提供实验室整体采购方案的专业公司,为广大采购和实验室解决了大量问题,几年来已经成为所有合作伙伴最优秀的合作伙伴,我们一直秉承信誉第一的原则,坚持不卖假货,哪怕利润损失也要为客户提供最好的产品

我们已经和国外500多个品牌建立了贸易往来,并在国际上享有相当知名度,现已经成为国外近100多个品牌中国指定代理,并成为其中国最优秀的代理商


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