苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是专业从事生物技术产品销售的高科技企业,是国内生物试剂、仪器、消耗品领域的知名企业之一。蚂蚁淘公司自成立以来,连续2年高速成长。公司的发展目标是建成专业从事生物技术产品销售、生产与开发的一流公司。
品牌名称: ABTBeads
附录 常见问题与解答 问题 可能原因 推荐解决方法 柱子反压过高 筛板被堵塞 清洗或更换筛板 填料被堵塞 清洗填料 裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22μm/0.45μm滤膜过滤。 样品纯化过程中曲线不稳 样品或 buffer 中有气泡 赶出气泡 样品和buffer进行脱气 洗脱组分中没有目的蛋白 样品中抗体浓度太低 使用其抗原做配体的介质 抗体被降解 适当的提高洗脱pH 样品与ProteinG结合力低 换用ProteinA或ProteinA/G树脂纯化 回收率逐渐减低 上样量太多 减少上样量 柱子太脏,载量降低 清洗树脂

产品性质
基质(Matrix) | |
配体(Ligand) | 重组蛋白G |
孔径(Beadsize) | 45-165μm |
最大流速(Flowmax) | 0.1MPa,1bar |
含20%乙醇的1×PBS | |
载量(Capacity) | >30mghumanIgG/ml 基质 |
pH范围(pHrange) | 3-10 |
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存,2年有效。
需准备试剂
【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH3.0
中和液:1MTris-HCl,pH8.5
使用方法
【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1ProteinGAgaroseResin的装填
将ProteinGAgaroseResin装入合适的层析柱中,注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)上样:将样品加到平衡好的ProteinGAgaroseResin中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
3)洗杂: 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
3SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:
1)去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%Triton?X-100清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)ProteinG琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是一家依托于中科院生命科学领域的高新技术生物公司,致力于生命科学领域产品的研发与销售,蚂蚁淘生物秉承为客户提供高质量产品及优质服务的理念,从事科研机构及生产企业所需的各种品牌生化剂、抗体、血清、ELISA试剂盒、移液枪、中小型仪器设备、耗材等专业进出口公司。主要经营品牌abcam、abnova、PeproTech、RD、CST、ABDSEROtec、AthensResearchTechnology、Chemicon、Evrogen、Bio-Rad、Zymed、wako、Bachem、Exiqon、Invitrogen、Eppendorf、Bioassay、cayman、TRC、Omega、Promega、Axygen、AssayPro等品牌中国区域.代理商,自成立以来发展迅速,产品服务得到全国广大生产企业、高校、科研院所、医疗系统及相关试剂公司的肯定,我们愿竭尽所能,赛因百奥生物在保证产品质量的基础上将以超低价格为您提供优质服务;同时也为广大经销公司提供充足货源,我们的目标是努力成为国内生物学产品行业专业供应商。