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ABTBeads提供一系列优质规则的活化琼脂糖微粒,用于亲和层析、SEC(体积排斥色谱)、固定化和多种纯化。产品主要涉及HIS-TAG融合蛋白的纯化,抗体纯化,GST融合蛋白纯化,酶和抗体的固定化,体积排斥色谱等方面的琼脂糖微粒。及一些分子生物学级电游试剂和用于蛋白纯化用的柱子。
产品列表
AFFINITYCHROMATOGRAPHY
HIS-TAGPURIFICATION HIS-TAG融合蛋白的纯化
•Chelatingagarosebeads
•ChelatingagarosebeadsNTA
•ChelatingRapidRun™agarosebeads
NEW:5mlCARTRIDGES!
ANTIBODYPURIFICATION 抗体纯化
•ProteinAagarosebeads
•ProteinARapidRun™agarosebeads
GSTPURIFICATION GST融合蛋白纯化
•Glutathioneagarosebeads
ENZYME&ANTIBODYIMMOBILIZATION 酶和抗体的固定化
AMINOGROUPS
•Glyoxalbeads
•GlyoxalRapidRun™agarosebeads
ACIDICGROUPS
•Aminoethylbeads
•AminoethylRapidRun™agarosebeads
SIZEEXCLUSIONCHROMATOGRAPHY 体积排斥色谱
LOWPRESSURE
•PlainandCrosslinkedAgarosebeads
HIGHPRESSURE
•RapidRun™Agarosebeads
ELECTROPHORESISREAGENTS 电游试剂
AGAROSEPOWDER
•AgaroseLEMolecularBiologyGrade
•AgaroseHRMolecularBiologyGrade
•AgaroseGAElectrophoresisGrade
•AgaroseLMMolecularBiologyGrade
ACCESSORIES 纯化用柱子等辅助产品
•Emptycolumns
•Emptyspincolumns
•Minicolumns
•Emptycartridges
品牌名称: ABTBeads
附录 常见问题与解答 问题 可能原因 推荐解决方法 柱子反压过高 筛板被堵塞 清洗或更换筛板 填料被堵塞 清洗填料 裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22μm/0.45μm滤膜过滤。 样品纯化过程中曲线不稳 样品或 buffer 中有气泡 赶出气泡 样品和buffer进行脱气 洗脱组分中没有目的蛋白 样品中抗体浓度太低 使用其抗原做配体的介质 抗体被降解 适当的提高洗脱pH 样品与ProteinG结合力低 换用ProteinA或ProteinA/G树脂纯化 回收率逐渐减低 上样量太多 减少上样量 柱子太脏,载量降低 清洗树脂

产品性质
基质(Matrix) | 4%琼脂糖微球 |
配体(Ligand) | 重组蛋白G |
孔径(Beadsize) | 45-165μm |
最大流速(Flowmax) | 0.1MPa,1bar |
含20%乙醇的1×PBS | |
载量(Capacity) | >30mghumanIgG/ml 基质 |
pH范围(pHrange) | 3-10 |
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存,2年有效。
需准备试剂
【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH3.0
中和液:1MTris-HCl,pH8.5
使用方法
【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1ProteinGAgaroseResin的装填
将ProteinGAgaroseResin装入合适的层析柱中,注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)上样:将样品加到平衡好的ProteinGAgaroseResin中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
3)洗杂: 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
3SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:
1)去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%Triton?X-100清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)ProteinG琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。