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ProteinGAgaroseBeads蛋白G琼脂糖珠
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
ProteinGAgaroseBeads 蛋白G琼脂糖珠 | 36405ES08 | 5ml | 4℃ | 546.00 |
ProteinGAgaroseBeads 蛋白G琼脂糖珠 | 36405ES25 | 25ml | 4℃ | 2186.00 |
ProteinGAgaroseBeads 蛋白G琼脂糖珠 | 36405ES60 | 100ml | 4℃ | 7426.00 |
产品描述
天然蛋白G(ProteinG)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和ProteinG结合性能不太一样,相比ProteinA, ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1(详见附录1)。
本品使用的是基因改造后的蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,ProteinGAgaroseResin以琼脂糖凝胶为基质,重组ProteinG为配基,具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

产品性质
基质(Matrix) | 4%琼脂糖微球 |
配体(Ligand) | 重组蛋白G |
孔径(Beadsize) | 45-165μm |
最大流速(Flowmax) | 0.1MPa,1bar |
含20%乙醇的1×PBS | |
载量(Capacity) | >30mghumanIgG/ml 基质 |
pH范围(pHrange) | 3-10 |
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存,2年有效。
需准备试剂
【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH3.0
中和液:1MTris-HCl,pH8.5
使用方法
【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1ProteinGAgaroseResin的装填
将ProteinGAgaroseResin装入合适的层析柱中,注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)上样:将样品加到平衡好的ProteinGAgaroseResin中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
3)洗杂: 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
3SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:
1)去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%Triton?X-100清洗;
② 用5倍柱体积的PBS,pH7.4 清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)ProteinG琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。