Nanodrop 2000在实验室的用途

一、产品应用

ND-2000是目前国内外实验室中使用最为广泛的一款微量分光光度计，其优越的性能、准确的结果赢得了广大用户的好评。

该产品可用于以下几个方面：

*紫外检测：常规紫外光波长下检测样品吸光值；

*核酸检测：可检测dsDNA、ssDNA、RNA等不同类型核酸的浓度及其在260nm、280nm处的吸光值；

*探针检测：检测荧光标记探针的吸光值，可用于去除未能标记探针的样品；

*细胞培养物检测：检测细胞培养物在600nm处的吸光值；

*蛋白检测：检测普通纯化后蛋白的浓度和280nm处的吸光值；

*蛋白标记检测：可检测被BCA、Bradford或Lowry标定的蛋白样品，自动画出标准曲线并计算出待测蛋白质浓度。

二、产品简介

Nanodrop2000超微量分光光度计是NanoDrop的最新产品，应用液体的表面张力特性，样品体积只需要0.5~2ul，在检测台上，经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受专利保护，并在全世界广受欢迎，其准确度与便利性让科学家得以更有效率进行各项研究。

NanoDrop2000使用高能量氙灯（pulsedxenonflashlamp）可提供190~840nm的全光谱检测，且不需要暖机，开机后立即使用。搭配高感度CCDarray检测器，检测吸收值可高达300Abs（dsDNA浓度2~15000ng/ul），大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。

待测样品的均质性是NanoDrop2000的最高要求，一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortexmixer震匀为最佳，若无vortexmixer也应以Pipette吸放数次混匀。若担心genomicDNA可能因前述动作而断裂，则改以55?C加热约一分钟，使样品在侦测前呈现均匀状态，以确保2ul具有代表性。

检测时选择不同检测模式，可以得到最快速的结果：

●NucleicAcid?C吸收光谱、230nm,260nm,280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280ratio、260/230ratio及核酸浓度。

●UV-Vis?C190~840nm间所有波长的吸收值及光谱（以1mm光径吸收值呈现）。

●A280蛋白质定量法?C280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质，须具有已知的质量消光系数（massextinctioncoefficient）方可计算。

●BCA、Bradford及Lowry?C依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果，自动画出标准曲线并计算Rsquare，待测蛋白质浓度。

*蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂，因呈色剂随时间会逐渐加深，使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品，在最佳时间内完成检测，以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品，每个标准品最多可做五重复。

*测蛋白质时样品体积需使用2ul，每个样品检测后需以Kimwipes低尘擦拭纸（编号：34155）擦拭15~20回，以避免呈色剂与蛋白质的残留。

浓度范围：

样品种类

最低浓度

最高浓度

(超过时请稀释样品)

再现性(五重复以上)

核酸

2ng/ul

15000ng/ul(dsDNA)

12000ng/ul(RNA)

浓度范围在2-100ng/ul时，SD为±2ng/ul

浓度范围大于100ng/ul时，CV为±2%

纯BSA

0.10mg/ml

100mg/ml

浓度范围在0.05-10mg/ml时，SD为±0.10mg/ml

浓度大于10mg/ml时，CV为±2%

蛋白质，以BCA方式定量

0.2mg/ml

8.0mg/ml

CV：±2%（在可侦测的浓度范围内皆然）

蛋白质，以modifiedLowry方式定量

0.2mg/ml

4.0mg/ml

CV：±2%（在可侦测的浓度范围内皆然）

蛋白质，以Bradford方式定量

100ug/ml

8000ug/ml

浓度范围在100-500ug/ml时，SD为±25ug/ml

浓度大于500ug/ml时，CV为±5%

蛋白质，以MiniBradford方式定量

15ug/ml

100ug/ml

浓度范围在15-50ug/ml时，SD为±4ug/ml

浓度大于50ug/ml时，CV为±5%

三、技术参数：

1、波长范围:190-840nm；

2、波长精度:1nm；

3、分辨率:<1.8nm(FWHMatHg253.7nm)；

4、其它:1mm光程长度（可自动调整到0.05mm）；

5、检测下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、检测上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率精确度：0.002absorbance(1mm光程)；

8、吸光率准确性：2%(at0.76at257nm)；

9、吸光率范围：0.02-300(相当于10mm光程)；

10、核酸检测周期：<5s；

11、体积：14cm×20cm。

四、使用方法举例：

dsDNA：在主画面点选NucleicAcid，计算机与仪器自动完成联机。依照DNA所溶于之液体准备该溶液（务必确认DNA溶于二次水、TEbuffer或哪一组kit的elutionbuffer）取出1.5ul点在侦测台上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉选SampleType选DNA-50，在SampleID位置输入样品名称，将样品混匀，取出1.5ul点在侦测台上，放下上臂后再按Measure。

五、结果整理：

NanoDrop2000软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处，若未指定，则档案会存在上一个使用者的档案内。

六、注意事项：

1.侦测后立即使用拭镜纸（Kimwipe类）擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走，再将此laboratorywipe吸过样品的面反折到内部，折迭四次后以单方向多次擦拭台面（DNA擦5次，Protein擦20次）。

2.同一滴液体只能做一次侦测，欲重复定量同一样品，请擦掉前一滴，重新取出一滴进行侦测。

3.基本上核酸样品可使用1~2ul做测量，随各液体体积特性之不同会有不同体积需求，原则上不超过2ul。并请使用2ulpipette避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质样品因呈色剂与蛋白质本身特性，务必使用2ul进行侦测。

4.当软件跳出错误讯息时，请详细阅读并依指示进行障碍排除。最常发生的情形是在侦测过程液柱并未正确形成，软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上下台面，或样品内有泡泡，将上臂拉起后，擦掉该滴样品，再重新进行侦测，必要时可将样品体积加大至2ul。

5.不可使用含有HydrofluoricAcid(HF)之腐蚀样品，其它无腐蚀性之液体皆可使用。