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GFP非常适合蛋白质标记,这是其无与伦比的成功的最大原因之一。尽管它非常适合实时成像,例如,作为TP53 MITE-seq屏幕的报告器[ 3另外,其他的应用导致GFP荧光的淬灭,这使得必须使用抗GFP抗体。组织样品的冷冻保存,组织学制备和使用固定剂通常会导致GFP荧光完全或部分丢失,这使得使用抗GFP抗体对于获得可靠的结果必不可少。通过Western Blotting检测GFP标记的蛋白,并通过免疫沉淀法研究蛋白之间的相互作用,也有必要使用GFP抗体。抗GFP抗体可作为多克隆或单克隆抗体使用,适用于在Western印迹,免疫沉淀,免疫组织化学,免疫细胞化学定位和免疫吸附测定(ELISA)上检测GFP,GFP变体和GFP融合蛋白。
方法 | 供应商 | 目录编号 | 样品参考 |
---|---|---|---|
芯片 | 英杰 | A-11122 | [ 4, 5 ] |
Abcam | ab290 | [ 6, 7 ] | |
流 | 英杰 | A-21311 | [ 8, 9 ] |
圣克鲁斯生物技术 | sc-9996 | [ 10, 11 ] | |
我知道了 | 英杰 | A-11120 | [ 12, 13 ] |
MilliporeSigma | 11814460001 | [ 14, 15 ] | |
圣克鲁斯生物技术 | sc-9996 | [ 16, 17 ] | |
Abcam | ab13970 | [ 18, 19 ] | |
MBL国际 | 598 | [ 20, 21 ] | |
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) | GF090R | [ 22, 23 ] | |
细胞信号技术 | 2955 | [ 24, 25 ] | |
发展研究杂交瘤库 | DSHB-GFP-12A6 | [ 26, 27 ] | |
基因 | TA150041 | [ 28, 29 ] | |
Takara Bio Clontech | 632593 | [ 30, 31 ] | |
国际卫生组织 | 英杰 | A-11120 | [ 32, 33 ] |
Abcam | ab13970 | [ 34, 35 ] | |
MilliporeSigma | 11814460001 | [ 36, 37 ] | |
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) | 04404-84 | [ 38, 39 ] | |
MBL国际 | 598 | [ 40, 41 ] | |
圣克鲁斯生物技术 | sc-9996 | [ 42, 43 ] | |
免疫组化 | 英杰 | A-11122 | [ 44, 45 ] |
Abcam | ab13970 | [ 46, 47 ] | |
默克密理博 | MAB3580 | [ 48, 49 ] | |
MBL国际 | 598 | [ 20,50 ] | |
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) | 04404-84 | [ 51, 52 ] | |
无IHC | 英杰 | A-11120 | [ 53, 54 ] |
免疫组化 | 英杰 | A-11122 | [ 55, 56 ] |
Abcam | ab183734 | [ 57 ] | |
细胞信号技术 | 2956 | [ 58, 59 ] | |
MilliporeSigma | 11814460001 | [ 60, 61 ] | |
生物传奇 | 902601 | [ 62, 63 ] | |
知识产权 | 英杰 | A-11120 | [ 64, 65 ] |
MilliporeSigma | 11814460001 | [ 66, 67 ] | |
圣克鲁斯生物技术 | sc-9996 | [ 68, 69 ] | |
Abcam | ab290 | [ 70, 71 ] | |
MBL国际 | 598 | [ 72, 73 ] | |
细胞信号技术 | 2956 | [ 74, 75 ] | |
世界银行 | 圣克鲁斯生物技术 | sc-9996 | [ 17,69 ] |
MilliporeSigma | 11814460001 | [ 76, 77 ] | |
英杰 | A-11122 | [ 78, 79 ] | |
Abcam | ab290 | [ 80, 81 ] | |
细胞信号技术 | 2956 | [ 82, 83 ] | |
ChromoTek GmbH | 3h9 | [ 84, 85 ] | |
Takara Bio Clontech | 632375 | [ 86, 87 ] | |
生物传奇 | 902601 | [ 88, 89 ] | |
MBL国际 | 598 | [ 90, 91 ] | |
蛋白质技术集团 | 66002-1-Ig | [ 92, 93 ] | |
圣克鲁斯生物技术 | sc-390394 | [ 94, 95 ] | |
Miltenyi Biotec | 130-091-833 | [ 96, 97 ] | |
基因 | TA150041 | [ 98, 99 ] |
随着抗GFP抗体的应用数量增加,提供这种试剂的供应商数量也增加了。Labome已对正式出版物进行了调查,以汇编已在正式文章中成功使用的抗GFP抗体列表(表1)。根据此调查,以下部分提供了主要供应商的列表以及对这些抗体的简短回顾。表2列出了通常用于不同方法的抗体。
一些供应商还提供抗GFP单域抗体或纳米抗体。这些抗体由单个可变抗体结构域组成,并基于衍生自骆驼科动物的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多,并且正在发现重要的用途。Caussinus E等人率先开发了deGradFP(图2),这是一种遗传编码的方法,可在任何真核系统中快速消耗目标GFP标记的蛋白质[ 100]]。该系统依赖于融合至F-box结构域的针对GFP的单结构域抗体片段(vhhGFP4)。该融合蛋白结合GFP并将其引导至蛋白酶体进行降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的唯一来源时,可以分析基因功能而无需担心任何残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标记的蛋白质和小的高亲和力单域抗GFP抗体,获得了用于分析微管,神经元和酵母细胞的纳米级空间分辨率[ 101 ]。Bhogaraju S等人用Chromotek的抗GFP琼脂糖珠(GFP纳米抗体/ VHH)免疫纯化了带有eGFP标签的SdeA,用于液相色谱-质谱分析[ 102]。Lundby A等人使用了来自ChromoTek的类似GFP-Trap磁珠免疫沉淀A549细胞裂解物中的GFP偶联蛋白[ 83 ]。