外泌体转运lncRNAPTENP1抑制膀胱癌的进展

即使外泌体能够包装长链非编码RNA（lncRNAs）去调节细胞内的交流，但是外泌体lncRNAPTENP1在膀胱癌（BC）中的角色还不清楚。鉴于这一点，JingQian和ZhengdongZhang等人带领他们的团队，研究了外泌体lncRNA-PTENP1在BC中的角色，并将研究成果于2018年10月3日发表在了MolecularCancer杂志（IF=7.76）上。在本次研究中，作者首先检测了PTENP1在BC和健康对照组的表达，发现PTENP1发生在组织和血浆外泌体中。通过ROC和AUC分析，作者评估了PTENP1的诊断准确度。为了决定外泌体PTENP1的功能，作者做了细胞表型和动物实验。发现PTENP1在BC病人组织和BC病人来源的血浆外泌体中显著下调；作者发现PTENP1主要被外泌体包装。外泌体PTENP1在BC病人和健康对照组中不同。正常细胞分泌的外泌体PTENP1，并且能够将其转运到BC细胞中，因此通过细胞凋亡和降低细胞迁移和侵袭能力抑制BC细胞的恶性行为。在体内，外泌体PTENP1能够抑制肿瘤生长。外泌体PTENP1能够通过结合miR-17调节PTENP1的表达。因此，作者得出结论，外泌体PTENP1可以考虑作为BC治疗的一个新的bioMarker。来源于正常细胞的外泌体能够将PTENP1转运到BC细胞中，能够在体内体外降低BC的紧张。在BC致癌过程中，外泌体PTENP1能够参与正常细胞到膀胱细胞的交流。

技术路线

实验结果
1. 血浆外泌体lncRNA-PTENP1在膀胱癌中显著，并且可以考虑作为膀胱癌的biomarker

图1血浆外泌体PTENP1在BC病人中的表达。

A.外泌体的显微图片。B.WB检测外泌体的marker(TSG和CD63)。C.qRT-PCR检测外泌体PTENP1的表达。E.在0、4、8、24h的血浆外泌体中PTENP1的表达。F.外泌体PTENP1反复冻融0、2、4、8次后检测外泌体PTENP1的表达。

2.过表达PTENP1能够抑制膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭 

图2PTENP1在BC细胞表型的效应。

EJ和J82细胞中转染PTENP1表达质粒或NC载体。A.qRT-PCR检测PTENP1在mRNA水平上的表达。B.CCK-8实验检测细胞的活性。C.克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。D.transwell实验检测EJ和J82细胞的侵袭能力。E.transwell实验检测EJ和J82细胞的迁移能力。F.流式细胞术检测EJ和J82细胞的凋亡能力。G.流式细胞术检测EJ和J82细胞的细胞周期。

3.膀胱癌细胞能够摄取正常细胞分泌的外泌体

图3外泌体PTENP1作为细胞内交流调节器。

外泌体从293A,J82和EJ细胞中分离。A.qRT-PCR检测加入RNase(2μg/ml)和共同加入TritonX-100(0.1%)20min后，293A,J82和EJ细胞培养基中PTENP1的表达。B.293A,J82和EJ细胞培养基中分离的外泌体的显微图片。C.WB检测细胞系中的外泌体的marker（TSG101和CD63）。D.qRT-PCR检测293A,J82和EJ细胞培养基中外泌体PTENP1的改变倍数。E.293A细胞外泌体被PKH67标记后孵育J82和EJ细胞3h。

4.过表达外泌体PTENP1能够抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭

图4外泌体PTENP1对膀胱癌细胞表型中的影响。

外泌体从转染PTENP1表达质粒和NC载体的293A细胞中分离。293A细胞的外泌体分离后孵育EJ和J82细胞24h。A.CCK-8实验检测细胞的活性。B.qRT-PCR检测PTENP1在mRNA水平上的表达。C.克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。D.transwell实验检测EJ和J82细胞的侵袭能力。E.transwell实验检测EJ和J82细胞的迁移能力。F.流式细胞术检测EJ和J82细胞的凋亡能力。G.流式细胞术检测EJ和J82细胞的细胞周期。

5.体内上调PTENP1或外泌体PTENP1都能抑制膀胱癌的发展

图5在体内过表达PTENP1和外泌体PTENP1对肿瘤的影响。

过表达PTENP1和外泌体PTENP1转染到EJ细胞中，命名为NC、PTENP1vector。外泌体从转染PTENP1/NC病毒载体的293A细胞中分离，命名为NC-Exos、PTENP1-Exos。A.接种NC,PTENP1-Exos,PTENP1vector和NC-Exos后的裸鼠成瘤实验。B.接种NC,PTENP1-Exos,PTENP1vector和NC-Exos后的异种移植实验。C.每两天检测肿瘤的体积。D.每15天检测终究得中重量。E.qPCR检测接种NC,PTENP1-Exos,PTENP1vector和NC-Exos后检测裸鼠肿瘤中的PTENP1和PTENP的表达。F.HE染色和免疫组化分析ki67和PTENP在肿瘤组织中的表达。

6.PTENP1通过吸附miR-17上调PTEN的表达

图6外泌体PTENP1通过miR-17调节PTEN的表达。

A.WB检测转染PTENP1表达质粒和NC载体的EJ和J82细胞中PTEN的表达。B.WB检测转染外泌体PTENP1和外泌体NC的EJ和J82细胞中PTEN的表达。C.miR-17结合PTENP的3’-UTR。D.WB检测转染外泌体PTENP1和miR-17mimics的EJ和J82细胞中PTEN的表达。

7.在膀胱癌细胞中，来自于转染PTENP1载体的正常细胞中的外泌体PTENP1能够提高PTENP1的表达

图7外泌体PTENP1调节的膀胱癌进展的示意图。

外泌体PTENP1通过ceRNA机制，吸附miR-17和调节PTEN的表达，进一步抑制膀胱癌的进展。