基因表达谱芯片常用于基因表达丰度的检测,其可靠性可通过芯片上内参(internalcontrols,通常是看家基因)和外参(externalcontrols)的结果来判断。内参杂交结果说明被检测样品的特征和质量,而外参杂交结果则为监测实验的过程提供依据。博奥生物提供的外参系统经Blast比较,选取8个与GeneBank中所有物种序列都没有同源性的酵母基因间核酸片段(Y1~Y8)作为外标,将其克隆到带有PolyA序列质粒载体中,通过体外转录的方法获得外标核苷酸片段相对应的PolyA-RNA。同时,设计针对Y1~Y8核苷酸片段的特异性引物,利用克隆有Y1~Y8片段的质粒为模板,经PCR扩增得到外参核酸片段,用于芯片点样。此外参体系的有效性已通过与多个物种的芯片进行杂交得到验证。
方框中所示8个信号点即为酵母基因间序列Y1-Y8点样样品,与PolyA-RNA混合溶液杂交后扫描结果
★安全可靠,不会与任何物种发生交叉杂交★可对高、中、低不同丰度的基因提供有效参照★可为双通道扫描参数平衡时的设置提供直观的判断,并为数据归一化处理提供有效参考★可根据实验需要通过调整外参质控溶液的加入量,改变荧光信号强度,更好地评估实验灵敏度
★用于各个物种基因表达谱芯片实验过程的质量控制,监测基片质量、反转录、杂交、杂交后清洗以及芯片扫描过程的有效性★用双荧光通道扫描仪扫描及数据分析时平衡不同荧光通道的扫描设置及数据归一化处理★用于评估芯片检测的灵敏度、线性范围和数据饱和度★确认数据处理的精确性
产品编号 | 产品名称 | 产品描述 |
360020 | 晶芯基因表达谱芯片外参试剂盒(PCR产物) | 外参基因Y1~Y8各10μl溶于水中,浓度均为0.2μg/μl |
360030 | 晶芯基因表达谱芯片外参试剂盒(PolyA-RNA) | 外参质控溶液A*(PolyA-RNAA)×100μl外参质控溶液B*(PolyA-RNAB)×100μl |
*外参质控溶液组成见下表
酵母外参名称 | Y1 | Y2 | Y3 | Y4 | Y5 | Y6 | Y7 | Y8 |
外参质控溶液A(1μl) | 10ng | 5ng | 1ng | 0.2ng | 10ng | 1ng | 3ng | 1ng |
外参质控溶液B(1μl) | 10ng | 5ng | 1ng | 0.2ng | 1ng | 10ng | 1ng | 3ng |
理论比值 | 1:1 | 1:1 | 1:1 | 1:1 | 10:1 | 1:10 | 3:1 | 1:3 |