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近期，蚂蚁淘生物推出现货（TwistAmpLiquidBasickit/TwistAmpEXOkit）液态重组酶聚合酶扩增(RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成DNA/RNA扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
TwistAmpLiquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行PCR和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种RPA组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmpRPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的TwistAmpLiquid试剂盒是现场或定点试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。
产品组成:
l4x1mlTwistAmpRehydrationbuffer
l1x250lmagnesiumacetate(280mM)
l6lofControltemplate
l45lofControlprimermix
l100lofPositivecontroltemplate
l45lofPositivecontrololigomix
相关扩展试剂盒额外提供试剂:
v100l50x外切酶III(TwistAmpLiquidexo/exoRTkits);
v100l50x逆转录酶(RT)(TwistAmpLiquidBasicRT/exoRTkits);
v100lof阳性对照模板(DNAwithTwistAmpLiquidexo/Basickits,RNAwithTwistAmpLiquidBasicRT/exoRTkits);
v45lof阳性oligomix(oligomixconsistsofprimersforBasic/BasicRTkits,primersplusauorescentlylabelledexoprobeintheexo/exoRTkits)
其他必需试剂(非试剂盒提供):
vddH2O;dNTPs;寡聚核苷酸;
产品信息:
Q20x核心反应mix有沉淀,是否影响其功能?
A在低温保存时,重组酶和辅助蛋白在50%甘油中20x核心反应mix中有时会发生可逆的共沉淀反应.所以在室温融化混匀后离心使其返回溶液形式并不影响其功能。
Q使用Liquid试剂盒做多重实验，能否制备mastermix?
A可以。Oligos,2xReactionBuffer,water,dNTPsand10xE-mix可以预先混合，置于冰上几个小时，在很多实例中可以过夜保存（性能上有任何改变都需要客户自行实验和评价）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。
Q使用Liquid试剂盒如何提高重复率和RNA模板的扩增率?
A先将RNA模板和醋酸镁混合后加入反应体系中，RNA的三级结构会抑制逆转录酶的活性，所以加入RNA和醋酸镁时，将两者分别加到在管内壁两侧或者将醋酸酶加在管内盖中，同时离心混入体系，这种操作会提高反应性能。
Q在TwistAmpLiquidE-mix中有沉淀，还能使用吗?
A可以。少量磷酸肌酸会发生沉淀不会影响RPA反应，只需在实验前通过涡旋将沉淀重悬离心即可。
Q在使用Liquid试剂盒时，是否能够使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?
A可以，请参考
http://dx.doi.org/10.7150/thno.15250和http://dx.doi.org/10.1186/s13148-015-0100-6
Q最小的RPA液体反应体系是多少?
A最小低至PL级，请参考
http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0153359
Q液体反应体系中需要加入多少dNTPs?
A1.8mM(总)dNTPs作为起始量即可。用户也可以根据自身实验优化浓度,有时1-12mM均适用。
Q如何提高扩增曲线的可重复性?
A优化扩增曲线考虑以下因素:对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为mastermix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。
蚂蚁淘(苏州)生物科技有限公司
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