TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、工业应用，食品检测，农业，公共卫生，生物安全和环境感知等相关领域。
RPA反应的最适温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的CDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。
近期，TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)
试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
TwistAmp® Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行PCR和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种RPA组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp®RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的 TwistAmp®Liquid试剂盒是现场或定点试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的
引物）取代 PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。
产品组成:
TwistAmpBasicKit（冻干态） | TwistAmpBasicKit(液态)NEW!!! |
● 96freeze-driedRPApellets ● 4x1mlTwistAmp®Rehydrationbuffer ● 1x250µl magnesiumacetate(280mM) ● 6µl ofControltemplate ● 45µl ofControlprimermix | ● 50µl20xCoreReactionMix ● 3ml2xReactionBuffer ● 500µl280mMMgOAc ● 550µl10xE-mix ● 100µlofPositivecontroltemplate ● 45µlofPositivecontrololigomix |
相关扩展试剂盒额外提供试剂:
◆ 100µl50x外切酶III(TwistAmp®Liquidexo/exoRTkits);
◆ 100µl50x逆转录酶(RT)(TwistAmp®LiquidBasicRT/exoRTkits);
◆ 100µlof阳性对照模板(DNAwithTwistAmp®Liquidexo/Basickits,RNAwithTwistAmp®LiquidBasicRT/exoRTkits);
◆ 45µlof阳性oligomix(oligomixconsistsofprimersforBasic/BasicRTkits,primersplusafluorescentlylabelledexoprobeintheexo/exoRTkits)
其他必需试剂(非试剂盒提供):
◆ ddH2O;dNTPs;寡聚
核苷酸;RNase抑制剂(仅用于RT试剂盒)
TwistDx产品信息:
货号 | 品名 | 规格 |
TALQBAS01 | TwistAmpLiquidBasicKit | 100rxn以上 |
TALQBASRT01 | TwistAmpLiquidBasicRTKit | 100rxn以上 |
TALQEXO01 | TwistAmpLiquidExoKit | 100rxn以上 |
TALQEXORT01 | TwistAmpLiquidExoRTKit | 100rxn以上 |
附:TwistAmpliquid试剂盒Q&A
Q20x核心反应mix有沉淀,是否影响其功能?
A在低温保存时,重组酶和辅助蛋白在50%甘油中20x核心反应mix中有时会发生可逆的共沉淀反应.所以在室温融化混匀后离心使其返回溶液形式并不影响其功能。
Q使用Liquid试剂盒做多重实验，能否制备mastermix?
A可以。Oligos,2xReactionBuffer,water,dNTPsand10xE-mix可以预先混合，置于冰上几个小时，在很多实例中可以过夜保存（性能上有任何改变都需要客户自行实验和评价）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。
Q使用Liquid试剂盒如何提高重复率和RNA模板的扩增率?
A先将RNA模板和醋酸镁混合后加入反应体系中，RNA的三级结构会抑制逆转录酶的活性，所以加入RNA和醋酸镁时，将两者分别加到在管内壁两侧或者将醋酸酶加在管内盖中，同时离心混入体系，这种操作会提高反应性能。
Q在TwistAmpLiquidE-mix中有沉淀，还能使用吗?
A可以。少量磷酸肌酸会发生沉淀不会影响RPA反应，只需在实验前通过涡旋将沉淀重悬离心即可。
Q在使用Liquid试剂盒时，是否能够使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?
A可以，请参考
Q最小的RPA液体反应体系是多少?
A最小低至PL级，请参考
Q液体反应体系中需要加入多少dNTPs?
A1.8mM(总)dNTPs作为起始量即可。用户也可以根据自身实验优化浓度,有时1-12mM均适用。
Q如何提高扩增曲线的可重复性?
A优化扩增曲线考虑以下因素:对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为mastermix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。
