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当时第一次看到这个技术的时候,简直可以用“震惊”、“惊艳”来形容。扩增速度真快啊,十几分钟就能出结果,比现在吭哧吭哧做PCR岂不是方便多了!可是几年过去了,似乎也没看到基于RPA技术的临床产品上市。说真的是有点失望的。就像对一部大导演拍的电影满怀期待,看完了发现其实不咋地是一样的心情。

 一、TwistDx公司的RPA技术重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification,RPA)具体原理不再介绍。2006年发明,到目前为止开发了一系列产品,都用在科研上。发表的论文也有一些,病原体检测、动植物检测都有。网上搜索了一番,发现整个2019年都没什么新闻,TwistDx官网的News板块还停留在2018年四月。公司被雅培收购以后,没什么动静。按理说这么优秀的技术,这么多年过去了,不应该没出临床产品。什么原因?成本高?(真正好的技术成本高点也无妨)专利?(不愿意授权给别的厂家共同开发产品?)技术本身准确性不如新闻说得那么好?雅培根本不重视这个方向?不得而知。 

二、等温扩增的技术难点笔者曾经接触过LAMP等温扩增一段时间。LAMP引物难设计,非特异扩增(假阳性)难消除;对实验条件要求不高,恰恰造成了容易污染实验环境;扩增时间跟样本浓度有关,低浓度样本扩增时间很长,跟荧光PCR相比时间上差不多。最终因为非特异扩增问题项目不了了之。

 三、国产等温扩增产品目前国内等温扩增科研产品不少,获得注册证的产品并不多。1.等温扩增微流控芯片北京某公司产品,LAMP方法,一次检测多种病原体。曾遇到某医生对这个仪器赞不绝口,使用方便,灵敏度较高。2.RNA恒温扩增上海某公司产品。据医生介绍(两年前),灵敏度不如荧光PCR法,结果不是很稳定。相信这两年产品性能已经有了改进。3.恒温扩增-层析法武汉某公司产品。做成了POCT产品,操作简便。如果能家用就更好了,感冒了在家里测一下,也省得去医院。但不知是如何规避污染问题的,卡盒如果没有密封措施,容易造成气溶胶污染。  

四、小结现在临床上荧光PCR使用广泛,既有大型的自动化工作站,也有小型的POCT产品。单纯靠等温扩增作为亮点并没有那么容易进入医院。不管是等温扩增还是荧光PCR,一个好产品最重要的还是结果准确、操作简便。有的技术号称扩增只需十几分钟,结果需要手工提取核酸花上一个小时,一样不实用。除了医疗用途,食品、畜牧等行业咱不懂,就不做评论。 


TwistDx产品信息:
货号
品名
规格
TALQBAS01
TwistAmpLiquidBasicKit
100rxn以上
TALQBASRT01
TwistAmpLiquidBasicRTKit
100rxn以上
TALQEXO01
TwistAmpLiquidExoKit
100rxn以上
TALQEXORT01
TwistAmpLiquidExoRTKit
100rxn以上
 
附:TwistAmpliquid试剂盒Q&A
Q20x核心反应mix有沉淀,是否影响其功能?
A在低温保存时,重组酶和辅助蛋白在50%甘油中20x核心反应mix中有时会发生可逆的共沉淀反应.所以在室温融化混匀后离心使其返回溶液形式并不影响其功能。
Q使用Liquid试剂盒做多重实验,能否制备mastermix?
A可以。Oligos,2xReactionBuffer,water,dNTPsand10xE-mix可以预先混合,置于冰上几个小时,在很多实例中可以过夜保存(性能上有任何改变都需要客户自行实验和评价)。一旦加入20x核心酶,短期保存在冰上也是可以的。
Q使用Liquid试剂盒如何提高重复率和RNA模板的扩增率?
A先将RNA模板和醋酸镁混合后加入反应体系中,RNA的三级结构会抑制逆转录酶的活性,所以加入RNA和醋酸镁时,将两者分别加到在管内壁两侧或者将醋酸酶加在管内盖中,同时离心混入体系,这种操作会提高反应性能。
Q在TwistAmpLiquidE-mix中有沉淀,还能使用吗?
A可以。少量磷酸肌酸会发生沉淀不会影响RPA反应,只需在实验前通过涡旋将沉淀重悬离心即可。
Q在使用Liquid试剂盒时,是否能够使用dUTP/生物素(酰)化dUTP?
A可以,请参考
http://dx.doi.org/10.7150/thno.15250 和 http://dx.doi.org/10.1186/s13148-015-0100-6
Q最小的RPA液体反应体系是多少?
A最小低至PL级,请参考
 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0153359
Q液体反应体系中需要加入多少dNTPs?
A1.8mM(总)dNTPs作为起始量即可。用户也可以根据自身实验优化浓度,有时1-12mM均适用。
Q如何提高扩增曲线的可重复性?
A优化扩增曲线考虑以下因素:对于低拷贝数模板,不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同(未混匀的反应扩增效率不佳)。另外,在低温情况下存贮,重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以,20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体,不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为mastermix量不足,在加入体系前,用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。

TwistAmpnfo试剂盒

TwistAmp nfo 试剂盒

TwistAmp nfo 试剂盒

货号:TANFO02KIT

订购可在线咨询,或者直接联系:13911291885,QQ:2208618493

 

TwistAmp?nfo试剂盒:可实现横向流动检测用DNA扩增。若想要通过终点夹心法(例如横向流动[LF]试纸条)检测有效DNA扩增反应的产物,则适合使用本产品。用户只需提供引物、探针和模板。更多信息请参阅手册

非常适用于:开发低成本的实地横向流动检测。

 

主要特点:

  • 终点检测
  • 单个分子检测
  • 与横向流动试纸条兼容
  • 多重检测
  • 96次反应
  • A+
所属分类:TwistDx试剂盒

  苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是一家经营医药标准品、化工环境标准品、高端试剂的专业公司,是全球领先科研方案的专业供应商。

  自成立以来,公司坚持以“保障客户利益是我们的第一追求”为经营宗旨,发展成为全球多个高端标准品公司国内总代理和授权代理商,能提供超过100000种的有机和无机标准品或试剂,产品涉及药企,科研单位,检测机构,工厂实验室和高校等绝大部分科研单位;同时提供优质的咨询服务,实力雄厚。

  公司以代理经营为主,代理20多个国外知名品牌的标准品、对照品,高端化学试剂,包括欧标EP,欧盟IRMM,日标JP,印度标IP,加拿大TRC,TLC,MC,英国BP,LGC,NIBSC,美国NIST,ChromaDex,美国Zyagen,挪威Chiron等。


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