PNA BIO INC致力于为基础研究和应用领域的实验室提供的研究产品和服务。

PNA Bio提供PNA（Peptide Nucleic Acid）产品，包括定制寡核苷酸，FISH探针，miRNA抑制剂，PNA钳夹探针和Fmoc单体。HPLC纯化后，它们与MS / MS数据一起提供> 95％的纯度。PNA产品由Panagene制造。

PNA Bio还提供工程化核酸酶服务，包括CRISPR / Cas9核酸酶（RGEN）合成，验证和Cas9蛋白以及敲除和敲入细胞系服务。

Cas9 Protein with NLS

含有NLS的Cas9蛋白

Cas9蛋白与指导RNA复合，为CRISPR / Cas9技术提供了优于质粒或mRNA转染的益处。大的好处是，您可以制备准备在体内工作的RNP复合物。Cas9蛋白寿命短（细胞半衰期约为24小时），因此可以大限度地减少脱靶效应和镶嵌现象。您还可以通过简单的切割试验轻松测试体外指导RNA的活性。此外，Cas9蛋白非常稳定，与mRNA相比，活性确认更容易。后，它在更广泛的生物体中是活跃的，例如线虫，昆虫，植物和非典型的模型系统，因为它不需要转录或翻译。

由PNA Bio提供的Cas9蛋白与NLS缀合，并且它是注射/转染准备形式。

Cy3-Cas9可以很容易地富集用CRISPR / Cas9复合物转染的细胞。

体外切割测定

将PCR产物与不同量的Cas9蛋白一起温育并在凝胶上运行。体外切割测定是检查sgRNA活性的简单方法。

转染RNP复合物

通过电穿孔（Neon）或脂质转染胺（LF2000）将sgRNA和不同量Cas9蛋白的RNP复合物转染到NIH3T3细胞中。

注射RNP复合物

对于小鼠胚胎注射，将60ng / ul Cas9蛋白的RNP复合物和两种sgRNA各15ng / ul注射到小鼠胚胎中。从幼仔准备尾部DNA并进行T7E1测定.Grey代表WT，绿色代表大的缺失（＃2,3,4,8），红色代表小/ del（＃5,6,7），蓝色代表纯合子小/ in（＃9,10）。

Cas9蛋白

·来自化脓性链球菌的Cas9蛋白与NLS

·注射，转染准备好

·通过体外切割测定，电穿孔（作为RNP复合物）和每批次的小鼠胚胎注射验证活性

·标准浓度（CP01，重组至1 mg / ml）：20 ug，50 ug或200 ug（50 ug x 4）

·高浓度（CP02和CP03，重组至5 mg / ml）：250 ug（CP02）或1 mg（CP03,250 ug x 4）

·包装：CP01为20 ug或50 ug，CP02 / CP03为250 ug

·建议使用CP01进行显微注射，建议使用CP02 / CP03进行电穿孔

·也可用：D10A Nickase（CN01）和D10A / H840A dCas9（CD01）蛋白

液体形式的Cas9蛋白

·可用1 mg / ml或5 mg / ml

·CP04-100：1mg / ml（6μM），20μg×5管

·CP04-500：5mg / ml（30μM），100μg×5管

Nickase和dCas9蛋白

·D10A Cas9 Nickase蛋白与来自化脓性链球菌的NLS（CN01和CN02）

·D10A / H840A Cas9裂解死蛋白与来自化脓性链球菌的NLS（CD01和CD02）

·以50μg大小提供，重构为1mg / ml（CN01 / CD01）或250μg大小，重构为5mg / ml（CN02 / CD02）。

Cy3-Cas9和Cy3-dCas9蛋白

·Cy3标记Cas9蛋白与NLS（CP06），以实现转染细胞的分选和可视化

·通过共聚焦显微镜检测荧光

·通过体外切割测定和细胞转染确认活性

·可提供浓度为5 mg / ml的50 ug（CP06-50）或200 ug（CP06-200）

·还可获得Cy3标记的dCas9蛋白（CD07）

通过电穿孔进入细胞，然后进行T7E1测定，证实Cy3-Cas9蛋白的活性。通过共聚焦显微镜确认荧光。