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sysmex-Partec流式细胞仪，你不知道的那些事--系列二：植物C值检测

来源：本站 作者：admin 时间：2019/1/8

【What】

C值是指物种单倍体或配子所含的DNA量，单位为pg(picogram)或Mb(million base pair), 而1pg相当于978 Mb。

【Why】

对于C值检测的意义：

1、与微卫星的扩增效率相关；

2、作为细胞核大小、花粉粒直径等表型的预示值,  基因组大小与细胞核大小、花粉直径等表型性状成正相关；

3、作为生态与环境的预示值, C值与植物的生活史、地理分布、物候期、单位面积生物量、对生长环境的敏感度（如温度和湿度的变化）等紧密相关，还能预测长期的变化（诸如全球变暖）所引起的植被改变；

4、利用推断的C值来揭示古生物学的趋势，例如,  根据化石细胞的大小，可以推断化石的DNA含量。在植物化石中，气孔保卫细胞的大小也可以用来估计DNA含量，进而寻求C值的进化趋势；

5、C 值对物种保育具有重要的意义，大基因组的物种往往存在更大的灭绝风险。

【How】

关于基因组大小实验说明

1、基因组大小的计算必须有一个适合的内参，因为外参对于样本的精确检测提供了过于大的样本变化。

2、参照物植物的基因组大小应该在待测样本的0.7到2.5倍范围内，否则样本的的线性不准确度会增加，并且要使用低中高三个范围的参照物。

3、已知物种基因组大小的查询网址：http://data.kew.org/cvalues/

4、样本基因组大小=待测样本的峰值/参照物的峰值*参照物基因组大小（pg/Mb）

流式细胞仪检测基因组大小的步骤

1、各取50mg内参和待测植物组织，放入培养皿中

2、加入500ul核裂解液

3、使用锋利刀片切碎组织，约30—60s

4、室温条件下孵育2—15min

5、使用CellTrics®过滤器过滤样本

6、加入含有RNA酶的PI染色液，根据样本的不同，室温避光孵育30—60min

7、使用有488nm或者532nm激光光源的流式细胞仪检测；

8、计算基因组大小，流式结果如下：

公式：样本基因组大小=135.48/98.29*参照物基因组大小（pg）

注意事项：

1、处理易褐变的材料时，即植物组织含较单宁类、多酚类次级代谢产物，可在染色过程中增加0.5 - 2 % (p/v)PVP-10/20 和/或0.01 % (p/v)的柠檬酸，pH 调节到4.5；

2、可使用其他低水平次级代谢产物的组织（叶柄,、花部、种子等缺乏活力的组织）

常用试剂盒：

可供检测机型：

Sysmex Partec提供价格合理的产品组合，这些高精度，便携式，电池供电，荧光和透射光LED显微镜在德国制造。是研究，免疫荧光，细胞生物学，病理学和寄生虫学中所有类型的荧光和光学显微镜的理想选择。 

Sysmex Partec提供多种超紧凑型台式流式细胞仪分析仪，最多可提供5个光源和16个光学参数。通过专用的科学和工业应用，我们的系统和优化的试剂盒涵盖了从常规到复杂的高端研究的所有内容。

独特的Sysmex Partec微秒实时采集功能，可将医疗保健，微生物学，工业应用（如食品质量控制）以及植物和动物细胞学中的所有流式细胞仪应用受益。这使得可以对体积，细胞，细胞亚群和其他颗粒进行实时，绝对计数。

真正的体积绝对计数技术是Sysmex Partec流式细胞仪系统的独特功能，是其他任何流式细胞仪所没有的。除绝对计数外，还为每个样品确定细胞或颗粒浓度。

苏州蚂蚁淘生物科技有限公司SuZhouebiomall BIOLOGicalTechnologyCo.,Ltd.成立于2017年，经过数年的努力已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物工程公司。特别是ELISA研发，代测，技术服务这一产品已使苏州蚂蚁淘成为中国知名公司。公司产品涵盖ELISA研发、细胞培养，各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、苏州蚂蚁淘还代理了美国药典标准品，中检所标准品，sigma,ScienCell,ATCC,wak0,omega，Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类知名公司的产品。苏州蚂蚁淘将进一步加强人才经营、产品经营，不断提升企业的核心竟争力，实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的国际化的公司，服务于生命科学领域，迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。