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| 产品试用反馈报告 | |||||||||||||||||||
| 客户信息 | |||||||||||||||||||
| 姓名 | 梁** | 单位 | 江苏大学 | 手机 | 15********* | ||||||||||||||
| ****** | 课题组 | ||||||||||||||||||
| 试用产品信息 | |||||||||||||||||||
| 货号 | DBI-2043 | 名称 | BestarTMqPCR mastermix | 申领日期 | 2016.3.10 | ||||||||||||||
| 试用反馈 | |||||||||||||||||||
| 试验操作流程 | 1.取出试剂盒各组分，待其溶解后，上下颠倒混匀，用离心机稍离心后置于冰盒中。 2.取出引物及事先逆转录好的 cDNA，溶解后混匀，置于冰盒中备用。  3.事先开启紫外对通风厨（包括试验所需的移液器、枪头、PCR 板等）进行消毒，准备开始试验。  4.按以下组份配制 PCR 反应用混合液（反应液配制在事先冷冻并能维持 0℃ 的 EP 管架上进行，如上图蓝色 EP 管架）
将 qPCR mastermix、Forward primer、Forward primer、RNase FreeH2O 等事先计算好用量（所需孔数一般=组别数x3平行+1，加1是防止因残留及枪头挂壁致反应液损失而产生反应不足的问题），将上述组份逐一加入 RNase Free 的 EP 管中，混匀，分装至 PCR 反应管中，每孔 19 µl，而后按组别每孔加入相对应的 cDNA 1 µl。稍混匀后，微离心式反应体系集中于 PCR 反应管底部，并尽量避免产生气泡。 5.使用 Real Time PCR 扩增仪，进行 PCR 反应。 将加好的PCR反应板，放置于仪器中，选着相应的PCR模板，按以下程序进行Real Time PCR反应 Stage1：预变性 Reps：1 95℃ 2min Stage2：Real-time PCR 反应 Reps：40 95 ℃10s 60 ℃30 s 72 ℃30 s Stage3：添加溶解度曲线 Reps：1 95 ℃15 s 60 ℃30 s 95 ℃15 s 6.实验结果分析 反应结束后，取出 PCR 反应板，放于回收垃圾桶中。将数据拷贝，关闭仪器。根据 Real-time PCR的扩增曲线和溶解度曲线判断产物的特异性，制作 Real-time PCR 定量标准曲线。用 Livak 方法：Ratio=2-△△CT, △CT= CT (目的基因) –CT（参照基因），△△CT = △CT（处理组）- △CT（对照组）进行计算，目的基因mRNA表达水平，用各自的参照基因 GAPDH 进行标化。 | ||||||||||||||||||
| 图片 | 1.扩增曲线 2.溶解度曲线   3.结果图  | ||||||||||||||||||
| 对本产品的评价 | 产品采用的是SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real-time PCR反应的试剂盒，其中各组份浓度适宜，配制简单便捷。产品说明及实验程序设置及浓度都有很好介绍，操作简便，具有高扩增效率、高扩增灵敏度及特异性等。 | ||||||||||||||||||
| 意见与建议 | 1.现在很多产品都采用SYBR Green II，是否SYBR Green II较I更有优势呢，适用范围更广。 | ||||||||||||||||||