riboMONITOR™转染指示剂

 
应用领域

-----评价实验细胞系的转染难易度
不同细胞系的转染效率是千差万别的，如何鉴定目的细胞系是否适合转染是细胞转染实验的基本问题。通常需要采用荧光标记的siRNA或miRNA进行相应的转染对照试验，但该类转染对照不均匀地分布于细胞各处，有时甚至会粘连成团，很难定量细胞转染效率。而riboTRACER™是细胞核富集的核酸指示剂，通过与细胞核染料结合，即可精确定量分析细胞转染效率和细胞毒性。
 


图3使用riboMONITOR™检测riboFect™CP转染siRNA于不同细胞系的转染效率
CellstransfectedwithriboTRACER^TMGreen(100nM) withriboFect^TMCP(5µl/well),fixedwithPFA,stainwithNUCLEOstain^TMandDEADstain^TM,20Xofmicroscope.

-----评价转染试剂的转染效果与细胞毒性
不同的转染试剂的转染效果差别很大。采用不适当的转染试剂进行转染实验时常发生转染效率不高的问题，甚至导致细胞大量死亡。riboMONITOR™通过荧光定量检测成功转染的细胞，死亡细胞，全部细胞，实现了细胞转染效率和细胞毒性的同时评估。



图4使用riboMONITOR™转染指示剂检测3种转染试剂转染293T细胞的转染效果
ReagentL的转染试剂细胞毒性较大，易引起细胞大量死亡，ReagentX转染试剂的转染效率不高。而riboFect^TMCP的转染效率较高，几乎无细胞毒性，能够顺利转染293T细胞。

-----优化转染条件，监测转染效果
转染试剂的用量和细胞密度是转染实验成功的关键，而保持转染实验转染效果批次间的稳定性，是实验可重复性的重要保证。riboMONITOR™通过结合细胞核染料，可快速检测出细胞的转染效率，优化最佳的转染试剂用量及细胞密度，确定最适宜的转染条件，以实现细胞的高效转染，减少实验中不必要的实验摸索。



图5采用riboMONITOR™转染指示剂优化ReagentL的试剂用量及转染时细胞密度
A-B：采用0.4µl和1µl的ReagentL转染Hela细胞的转染效果及细胞毒性检测；C-D：采用0.4µl和1µl的ReagentL分别进行4万和5万细胞的转染实验，结果表明采用1µlReagentL，4万细胞进行转染时转染效率最高（C），细胞毒性最小（D）

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