Life细胞凋亡产品（二）

Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析：

细胞活性和细胞毒性
细胞增殖和细胞周期
细胞凋亡
自噬
氧化应激
内吞作用和吞噬作用
细胞内离子

本文为大家介绍细胞凋亡的产品

细胞凋亡(细胞程序性死亡)是细胞正常发育过程中，由遗传控制的细胞消亡现象。凋亡调控异常与许多疾病状态有关，例如阿尔茨海默病、中风以及癌症。区别于坏死细胞的是，凋亡细胞的形态学特征为核染色质固缩、细胞皱缩以及产生膜包裹凋亡小体。细胞凋亡的生物化学特征在于基因组的片段化及几种细胞蛋白的解离或降解。
与细胞活性一样，无法通过任何单一参数来准确界定细胞彻底死亡；因而采用几种不同的方法研究细胞凋亡通常十分有利。候选抗肿瘤药物若无法诱导细胞凋亡，其临床功效通常较差，因此凋亡分析成为重要的高通量药物筛选工具。

3.1 活细胞caspase检测

Vybrant® FAM Caspase Assay Kit和Image-iT® LIVE Caspase Detection Kit以新颖技术检测活细胞中活化的caspase，利用的是caspase的荧光抑制剂(FLICA™)。此试剂中的FMK可通过caspase特异性氨基酸序列与cysteine进行共价反应，并接上carboxyfluorescein基团(FAM)作为信号报告分子。FLICA™可通过识别序列与活化的caspase的酶反应中心相互作用，接着通过FMK共价结合。FLICA™抑制剂可穿透细胞，且不具细胞毒性。未结合的FLICA™分子会扩散至细胞外，经冲洗即可去除；剩余的绿色荧光信号则可直接反映出加入抑制剂时处于活化状态的capase量。Vybrant® FAM Caspase Assay Kit可用于流式检测，Image-iT® LIVE Caspase Detection Kit则可用于成像。

图7. 使用Vybrant® FAM Caspase Assay Kit的原理及检测结果示例。

CellEvent® Caspase-3/7 Green检测试剂是一种适用于活化的 caspase-3/7的新型荧光底物，可用于活细胞及固定细胞成像，最大吸收/发射波长约为 502/530 nm。该产品是一个与核酸结合染料相连的四个氨基酸多肽(DEVD)，在凋亡细胞中，caspase-3/7 活化后，DEVD 肽被切断，使染料能够与DNA 结合，并产生明亮的荧光。CellEvent® 试剂适用于成像(图8)、高内涵筛选和流式细胞术。

图8. 细胞凋亡的多色成像。使用 30 μM 依托泊苷处理U2OS细胞18小时，诱导细胞凋亡。首先采用7.5 μM CellEvent® Caspase-3/7 Green 检测试剂(C10423，绿色荧光)对处理细胞进行染色，检测细胞凋亡，用Hoechst 33342核酸染料(H3570，蓝色荧光)标记细胞核，然后用 150 nM MitoTracker® Deep Red FM (M22426，粉色荧光) 标记线粒体。经固定和透化处理后，采用Alexa Fluor® 546鬼笔环肽(A22283，橙色荧光)标记肌动蛋白。

产品列表

货号	产品名称	应用	检测的Caspase种类
V35117	Vybrant® FAM Poly Caspase Assay Kit	FCM	All
V35118	Vybrant® FAM Caspase-3 and -7 Assay Kit	FCM	3/7
V35119	Vybrant® FAM Caspase-8 Assay Kit	FCM	8
C10423	CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent	FCM;IF;HCS	3/7
C10427	CellEvent™ Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit	FCM	3/7
R37111	CellEvent™ Caspase-3/7 Green ReadyProbes® Reagent	FCM;IF	3/7
I35102	Image-iT® LIVE Red Caspase-3 and -7 Detection Kit	IF	3/7
I35106	Image-iT® LIVE Green Caspase-3 and -7 Detection Kit	IF	3/7
I35101	Image-iT® LIVE Red Poly Caspases Detection Kit	IF	All
I35104	Image-iT® LIVE Green Poly Caspases Detection Kit	IF	All
E13183	EnzChek® Caspase-3 Assay Kit #1, Z-DEVD-AMC substrate	IF;M	3
E13184	EnzChek® Caspase-3 Assay Kit #2, Z-DEVD-R110 substrate	IF;M	3
KHO1091	Caspase-3 (Active) Human ELISA Kit	ELISA	3
KHZ0022	Caspase-3 Colorimetric Protease Assay Kit	M	3
R35100	RediPlate™ 96 EnzChek® Caspase-3 Assay Kit	M	3

ELISA: Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay FCM: FCM: flow cytometry HCS: High Content Screening IF: Immunofluorescence M: microplate assay

3.2 PARP蛋白质水解

在凋亡过程中，ICE家族成员如caspase-3及caspase-7会将PARP裂解而产生85 kDa和25 kDa的片段。RARP裂解是细胞凋亡中最典型的特征之一。Anti-PARP FITC Apoptosis Kit包含了具FITC结合物的anti-PARP抗体，能专一性辨识裂解后的PARP所产生的85 kDa (p85)片段，而排除完整全长的PARP蛋白。细胞可利用流式细胞仪加以分析，并以阳性FITC染色检测正处于细胞凋亡过程的细胞百分比。

产品列表

货号	产品名称	应用	标记	规格
AHM2011	Anti-PARP FITC Apoptosis Kit	FCM	FITC	sts

4.1 染色质固缩

在凋亡细胞中，核染色质固缩的情形会增加，这些压缩的细胞核经部分核染料标记后，会呈现高度荧光状态。Hoechst33342为可经UV激发的核酸染料，能轻易地被所有细胞吸收。此染料的蓝色荧光在凋亡细胞的的浓缩细胞核中格外明亮。相比之下，PI仅能进入细胞膜受损的细胞。同时使用这两种染料，便能以流式细胞仪或荧光显微技术获得的染色结果区别健康细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

图9. Jukat细胞经10 μM 喜树碱处理4小时(右图)或未处理(左图)后，用流式细胞仪进行分析。经喜树碱处理后的细胞具有更高比例的凋亡细胞。L=活细胞, D=死细胞, A=凋亡细胞。

产品列表

货号	产品名称	应用	细胞类型	Ex/Em
H3570	Hoechst 33342	FCM;IF	活细胞	350/461
V35003	Vybrant® DyeCycle™ Violet Stain	FCM	活细胞	369/437
P3566	Propidium Iodide	FCM;IF	固定细胞	535/617
V13244	Vybrant® Apoptosis Assay Kit #5, Hoechst 33342/Propidium Iodide	FCM	活细胞	350/461 (apoptotic) 535/617 (dead)
V23201	Chromatin Condensation & Membrane Permeability Dead Cell Apoptosis Kit with Hoechst 33342, YO-PRO®-1, and PI dyes	FCM	活细胞	350/461 (live) 491/509 (apoptotic) 535/617 (dead)
A35135	Vybrant® DyeCycle™ Violet/SYTOX® AADvanced™ Apoptosis Kit	FCM	活细胞	369/437 (apoptotic) 546/647 (dead)

4.2 TUNEL检测

细胞凋亡过程中发生的DNA片段化会导致DNA链断裂。TUNEL检测(terminal deoxynucleotidyl transferase dUPT nick end labeling)则广泛应用于检测凋亡细胞中的DNA缺口。DNA片段化是检测细胞凋亡末期阶段最可靠的方法之一，DNA片段经核酸酶裂解或造成切口后，会暴露出大量的3’-羟基端。这些末端接着通过TUNEL技术以BrdUTP及terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)加以标记。一旦嵌入DNA后，BrdU便能利用标有Alexa Fluor® 488或FITC的anti-BrdU抗体进行检测。

图10. 人淋巴瘤细胞经喜树碱处理4h后，使用APO-BrdU™ TUNEL Assay Kit (A23210)检测。具有DNA链缺口的凋亡细胞可通过TUNEL和绿色荧光检测到，而坏死细胞则被红色荧光的PI染色。

产品列表

货号	产品名称	应用	规格
A23210	APO-BrdU™ TUNEL Assay Kit - with Alexa Fluor® 488 Anti-BrdU	FCM;IF	60 assays
KHO1001	APO BrdU (TUNEL) Kit	FCM	60 assays

阅读原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014040004.html

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