RealTime ready自由定制您的qPCR检测方法

RealTimereadyqPCR分析方法是罗氏诊断公司应用科学部于2010年最新推出的即用型qPCR定制检测方法，可快速灵敏地一次性定量6-384个基因的表达情况。您可于免费的RealTimeready在线配置工具上，自由选择人类相关靶基因并进行定制型多孔检测板的配置。除了通过基因名称搜索，您还可以直接从信号通路或功能基因组中直观地选择靶基因，整个定制过程就像您在网上购物一般，随心所欲，简单便捷。

RealTimereadyqPCR分析方法 每种RealTimereadyqPCR分析方法均含有对应于您的靶基因的特异性引物及UPL水解探针。每种分析方法在设计后都使用通用生物学样品材料，以标准PCR条件在LightCycler®480上进行过测试。   每种分析方法都能满足以下严格标准： n  线性动态范围至少为3个数量级。 n  PCR扩增效率为2.0±0.2。 n  标准曲线R2值为0.99至1.00。 n  扩增特异性高，凝胶分析中无副产物生成。   正如所有UPL检测，RealTimeready检测可成功用于所有实时荧光PCR仪上。由于仅需加入模板和预混液，RealTimeready可以大量节省您合成引物和荧光探针所需的时间，并且一次性完成您任意定制的靶基因组合的检测，可以获得大量有特别针对性的实验数据，非常适合用于表达谱芯片的下游验证等中等通量，且具有明确目标性的应用。   免费的在线设计工具 可使用在线的免费软件ProbeFinder进行RealTimeready分析方法设计。有以下三种靶基因的导入方式。  “SearchbyKeyword”支持通过基因名称、基因标志、公共访问标识、生物学过程、蛋白功能或最多5个关键词进行搜索。通过“BatchUpload”功能，可最多进行384个不同访问标识的搜索。 “SearchbyPathway”从细胞信号通路的直观图示中进行检测目标的选择。 “SearchbyFocusPanel”从大型基因家族如GPCR、蛋白激酶，或功能相关群组如转录因子或离子通道等的预选择列表中进行检测目标选择。

凝胶分析中未检测出副产物 图1：应用RealTimeready检测48个人类GPCR家族的基因。   5个数量级稀释检测扩增线性，显示PCR效率为99.2至100%。 图2：对12个人凋亡信号通路检测，均进行5个数量级稀释并作线性图（Cpvs对数浓度）。     图3：UPL探针整合入LNA核苷酸. LockedNucleicAcids是一类核苷酸类似物，可增强碱基堆积及骨架重组结构，显著增强核酸分子的热稳定性及双螺旋结构稳定性。

针对LightCycler®480实时荧光PCR系统的RealTimeready定制型多孔检测板   LightCycler®480MultiwellPlates96或384孔定制型多孔检测板可根据您的需要进行RealTimeready方法选定。有大量不同的配置板式（图4、5）可用。96孔板预置及干燥处理后，支持PCR反应容积为20μl，384孔板为10ul；检测时仅需添加CDNA与RealTimereadyDNAProbesMaster，即可快速获得检测结果，检测结果真实可靠。   每块板最多保留3个孔用于您所选定的内参基因检测。而且，大多数板式的布局格式均具有预置的误差检测的设定。   当然，您也可以订购单个基因的分析方法，由罗氏为您设计并合成相应的RealTimereadyAssay。     您也可以访问www.realtimeready.Roche.com，通过观看简短的视频演示获取详细信息。

图4：RealTimereadyCustomPanel96-16+ 图5：RealTimereadyCustomPanel384-64+