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献给初学者: ELISPOT 操作全攻略

ELISpot 实验操作流程
 
ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测,英文:Enzyme-linkedImmunospotAssay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(即ELISA技术),能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理,一句话概括就是:用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子,并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。
 
将细胞因子特异性单克隆抗体包被于乙醇处理过的PVDF膜板上。具体板子处理和包被方法请参考:
https://www.Mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/plate-coating-guide
包被特异性抗体
加入细胞孵育
 
将细胞加入到酶标孔中,不同组加不同的刺激剂或者不加刺激剂。 具体细胞处理方法请参考:
https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/cell-handling
 
细胞分泌的细胞因子与包被抗体结合。
捕获细胞因子
结合检测抗体
 
将多余细胞除去并洗板后,将生物素标记的检测抗体加入到酶标孔中。
 
加入连霉亲和素标记的酶偶联物
加入连霉亲和素标记的酶偶联物
 
加入底物
https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/enzymes-substrates/enzyme-conjugates
加入底物
读板与结果分析
 
使用酶联免疫斑点读板仪读取斑点并分析。信息来源:
https://www.mabtech.com/knowledge-center/assay-principles/elispot-assay-principle/elispot-step-step

 阅读原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014040021.html


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