FluoroSpot荧光免疫斑点实验

FluoroSpot荧光免疫斑点实验可用于单细胞水平上检测多种细胞因子的分泌。和ELISpot一样，是一种灵敏、操作简单的方法。在FluoroSpot实验中，不同细胞因子的单抗混合物用到了夹心法中。不同于ELISpot，FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测，另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种细胞因子的检测。接下来使用红色荧光标记的Streptavidin和绿色荧光标记的抗tag抗体进行信号的级联放大。使用自动荧光读板仪分析产生的2种颜色的荧光斑点并生成图像。图像叠加后上显示在相同位置的荧光斑点表示为同时分泌2种细胞因子的细胞。

图1 FluoroSpot检测原理图2 白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞(300,000 cells/well)过夜培养后，使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ和 /

或IL-22的细胞。使用AID(AutoimmunDiagnostika GmbH) 公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC(IFN-γ) 和Cy3 (IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
和IL-22的细胞。

FluoroSpot试剂盒信息

人FluoroSot试剂盒
产品名称	编号	供应商
HumanIgG/IgAFluoroSpotkit	FS-05R06G	Mabtech
HumanIgG/IgMFluoroSpotkit	FS-05R17G	Mabtech
HumanIgG/IgA/IgMFluoroSpotkit	FS-050617	Mabtech
HumanIFN-γ/GranzymeBFluoroSpotkit	FS-0110	Mabtech
HumanIFN-γ/GranzymeBFluoroSpotkit,pre-coated	FSP-0110	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-2FluoroSpotkit	FS-0102	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-2FluoroSpotkit,pre-coated	FSP-0102	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-5FluoroSpotkit	FS-0108	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-13FluoroSpotkit	FS-0104	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-17AFluoroSpotkit	FS-0103	Mabtech
HumanIFN-γ/IL-22FluoroSpotkit	FS-0118	Mabtech
HumanIL-1β/GM-CSFFluoroSpotkit	FS-1215	Mabtech
HumanIL-1β/IL-6FluoroSpotkit	FS-1213	Mabtech
HumanIL-1β/IL-12/-23(p40)FluoroSpotkit	FS-1214	Mabtech
HumanIL-1β/TNF-αFluoroSpotkit	FS-1209	Mabtech
HumanIL-6/GM-CSFFluoroSpotkit	FS-1315	Mabtech
HumanIL-6/IL-12/-23(p40)FluoroSpotkit	FS-1314	Mabtech
HumanIL-6/TNF-αFluoroSpotkit	FS-1309	Mabtech
HumanTNF-α/GM-CSFFluoroSpotkit	FS-0915	Mabtech
HumanTNF-α/IL-12/-23(p40)FluoroSpotkit	FS-0914	Mabtech
猴FluoroSot试剂盒
MonkeyIgG/IgAFluoroSpotkit	FS-05R24G	Mabtech
MonkeyIFN-γ/IL-2FluoroSpotkit	FS-2122	Mabtech
小鼠FluoroSot试剂盒
MouseIFN-γ/IL-2FluoroSpotkit	FS-4142	Mabtech
MouseIFN-γ/IL-5FluoroSpotkit	FS-4143	Mabtech
MouseIFN-γ/IL-17AFluoroSpotkit	FS-4144	Mabtech

*注意事项 1. 使用抗CD28抗体对CD28共刺激，可以提高IL-2的分泌在FluoroSpot实验中，捕获抗体对细胞因子的捕获可能会影响细胞因子的分泌。板孔里包被的IL-2捕获抗体能够降低游离IL-2的分泌，而游离IL-2对T细胞活化是必须的。为了补偿这种影响，可使用抗CD28单抗进行共刺激，在合适的浓度下可以增加特异性抗原的分泌而不会增加自然分泌。其他细胞因子也有可能会受到捕获抗体的影响，因此使用抗CD28抗体刺激在很多情况下可以有效的解决这个问题。2.建议使用带分离滤光片的自动读板仪分析
建议使用带FITC和Cy3滤光片的自动荧光ELISpot分析仪仪分析FluoroSpot。为了准确的检测2种细胞因子分泌的细胞，分析仪需要具有对2种滤光片获得的信号进行叠加分析的能力。

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