InGex TGIRTIII Enzyme 说明书苏州蚂蚁淘实验试剂有限公司

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​TGIRT-IIIEnzyme

TGIRT-III酶

*规格:

10Reactions(TGIRT10)50Reactions(TGIRT50)5x50l(TGIRT5x50)10x50l(TGIRT10x50)

单位定义：

TGIRT的一个单元-III逆转录酶（RT）活性是酶的使用聚在60℃下聚合1纳摩尔的dNTP的在1分钟（RA）所需要的量/寡（dT）42作为底物。

酶浓度：

200单位/l

酶储存缓冲液：

20mMTris-HCl（pH7.5），500mMKCl，1mMEDTA，1mMDTT，50％甘油

酶性质和新型活性：

比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性，持续性和保真度，允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端CDNA合成。1新的端对端模板切换活动，其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR适配器，并且不再需要单独的RNA3-衔接子连接步骤。1这种模板切换活动大大促进了链特异性RNA-seq文库的构建，其偏倚偏差小于使用随机六聚体引物的方法，或者使用RNA连接酶进行衔接连接。1,4,7,8退火引物有效的cDNA合成将退火的引物应具有推测的T米60下用在反应混合物中基板在室温下，通过加入dNTP的反应开始30分钟酶的建议预孵育。新应用的zui佳条件应通过测试25至450mMNaCl的盐浓度范围来确定。

酶的建议用途：

综合股特异性转录组分析。8全细胞，外来体，血浆和其他无细胞RNA的RNA-seq。7,8miRNA和其他小型非编码RNA的分析。1,11,14通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰。4,5,12,13RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析。1,9使用诸如SHAPE和DMS修饰之类的方法进行RNA结构映射。1,15长cDNA的合成1RT-qPCR的。1用于表征RNA-蛋白质相互作用的irCLIP。9DMS-MaPseq用于全基因组或靶向RNA结构体内探测。15FFPE肿瘤样本分析（咨询InGex）通过TGIRT模板切换的单链DNA-seq（参见InGex）

酶的优点：

综合转录组分析比传统方法更少的偏差。

根据zui近的出版物，核糖核酸裂解的片段化通用人参考RNA样品的TGIRT-seq概括了与非链特异性TruSeqv2相比较的人转录本和尖峰的相对丰度，优于链特异性Tru-Seqv3。TGIRT-seq比TruSeqv3显着更强的链特异性，并消除TruSeq固有的随机六聚体启动的取样偏差。TGIRT-seq显示更均匀的5至3基因覆盖，并识别比TruSeq更多的剪接点。TGIRT-seq可以在与结构化小ncRNA（包括tRNA）相同的RNA序列中同时进行mRNA和mRNA的分析，这些tRNA基本上不存在于TruSeq数据集中。8

全细胞，外来体，血浆和其他细胞外RNA的RNA-seq。

快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建5小时）;需要少量RNA（低ng范围）;全面的转录谱，包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA，包括tRNAs，pre-miRNAs和其他结构化小ncRNA的全长读数;较常规方法较少的偏差和较大的链特异性。7,8

比逆转录病毒RT更高的持续性和链置换活性。

使用锚定寡核苷酸（dT）引物构建多聚腺苷酸化RNA的RNA-seq文库，具有比没有核糖核酸步骤的逆转录病毒RT更均匀的5至3覆盖率。1通过基于毛细管电泳的方法，如SHAPE或DMS结构图，通过显着的长度读取长度和比逆转录病毒RT更少的过早停止来实现RNA结构测绘。1使得可以获得tRNA和其他小的ncRNA的全长的端到端cDNA，这些cDNA对于逆转录病毒RT是难治的。4-7通过TGIRT模板切换的RNA-seq文库构建，如miRNA分析，RIP-seq，HITS-CLIP，CRAC，​​核糖体分析等方法。

快速处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建5小时）;需要少量RNA（低ng范围）;不需要RNA连接酶，通过在该过程中具有较少的步骤，偏倚较小并且更有效。

参考文献：

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