HEPES缓冲液是细胞培养实验中经常用到的缓冲液。在开放式的培养条件中,加入HEPES缓冲液,可防止培养基内pH氧化升高,从而将PH维持在7.0左右。那么,HEPES缓冲液的配制步骤和方法是怎样的,下面就给大家详细介绍。
HEPES分子量为238.31,化学名:4-羟乙基哌嗪乙磺酸,分子式:C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物缓冲剂,pH值缓冲范围:6.8-8.2,用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。
关于HEPES缓冲溶液的配制,不同的文献资料有不同的说法。根据用途,一种是单纯的HEPES+NaOH,另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下:
一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制
119.15gHEPES溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)
HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液调节pH值,最后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5MNaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
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