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    公司背景：SICGEN抗体是一家葡萄牙生物技术公司，专门研发和生产用于生命科学研究的抗体。公司利用尖端技术，以最优的质量和最具竞争力的价格，致力于成为世界多克隆抗体及抗体相关产品和服务的提供商。它既是一个产品公司也是一个服务公司，它的主要业务是发现和销售用于研究和科学目的的新抗体。多年来，SICGEN一直为国内外主要大学、科研机构、制药企业和生物技术公司生产定制的多克隆抗体。

    产品线：新抗体；蛋白；定制服务

GFP非常适合蛋白质标记，这是其无与伦比的成功的最大原因之一。尽管它非常适合实时成像，例如，作为TP53MITE-seq屏幕的报告器[ 3另外，其他的应用导致GFP荧光的淬灭，这使得必须使用抗GFP抗体。组织样品的冷冻保存，组织学制备和使用固定剂通常会导致GFP荧光完全或部分丢失，这使得使用抗GFP抗体对于获得可靠的结果必不可少。通过WesternBlotting检测GFP标记的蛋白，并通过免疫沉淀法研究蛋白之间的相互作用，也有必要使用GFP抗体。抗GFP抗体可作为多克隆或单克隆抗体使用，适用于在Western印迹，免疫沉淀，免疫组织化学，免疫细胞化学定位和免疫吸附测定（ELISA）上检测GFP，GFP变体和GFP融合蛋白。

随着抗GFP抗体的应用数量增加，提供这种试剂的供应商数量也增加了。Labome已对正式出版物进行了调查，以汇编已在正式文章中成功使用的抗GFP抗体列表（表1）。根据此调查，以下部分提供了主要供应商的列表以及对这些抗体的简短回顾。表2列出了通常用于不同方法的抗体。

一些供应商还提供抗GFP单域抗体或纳米抗体。这些抗体由单个可变抗体结构域组成，并基于衍生自骆驼科动物的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多，并且正在发现重要的用途。CaussinusE等人率先开发了deGradFP（图2），这是一种遗传编码的方法，可在任何真核系统中快速消耗目标GFP标记的蛋白质[ 100]]。该系统依赖于融合至F-box结构域的针对GFP的单结构域抗体片段（vhhGFP4）。该融合蛋白结合GFP并将其引导至蛋白酶体进行降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的唯一来源时，可以分析基因功能而无需担心任何残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标记的蛋白质和小的高亲和力单域抗GFP抗体，获得了用于分析微管，神经元和酵母细胞的纳米级空间分辨率[ 101 ]。BhogarajuS等人用Chromotek的抗GFP琼脂糖珠（GFP纳米抗体/VHH）免疫纯化了带有eGFP标签的SdeA，用于液相色谱-质谱分析[ 102]。LundbyA等人使用了来自ChromoTek的类似GFP-Trap磁珠免疫沉淀A549细胞裂解物中的GFP偶联蛋白[ 83 ]。

图2. deGradFP系统（适应于"使用突变体，敲除和转基因研究果蝇的基因功能。WIRES发展生物学，2012，dx.doi.org/10.1002/wdev.101）

GFP形成非常稳定的桶形结构，由11个围绕中央α螺旋的β折叠组成。Beta表格通过富含脯氨酸的环连接。每张中的氨基酸侧链交替突出到蛋白质内部或从表面向外突出。GFP发色团是通过Ser65，Tyr66和Gly67的分子内环化作用形成的，它几乎位于桶的中心[ 146 ]。尽管这三个氨基酸基序在自然界中很常见，但它不会产生荧光。GFPβ-桶的独特内部环境产生了发色团，并保护了它免于猝灭[ 147 ]。生色团的形成是自催化的[ 147]。GFP以主要质子化状态存在，最大激发波长为395nm，次要的非质子化状态具有475nm的激发峰[ 148 ]。两者的荧光发射在510nm处形成峰。

自从GFP在生物科学中流行起来以来，人们一直在努力调整其荧光。水母GFP非常明亮且耐光，但其最大激发波长（395nm）位于紫外线范围的边界。紫外线在成像时会损坏细胞结构。诱变筛选发现了一个点突变体S65T，其最大激发波长移至488nm[ 149]。这种称为“EGFP”的变体避免了使用紫外线进行激发的问题，并且可以使用常用的异硫氰酸荧光素（FITC）滤光片轻松成像。它也是最亮，最光稳定的GFP。但是，使用GFP的一个重要缺点是其光谱行为会受到pH值的影响。GFP荧光指向内室或溶酶体等酸性区室时会被淬灭。当用413纳米的光强照射（或通过双光子激发）后，用488纳米的光激发时，可光活化变体（PA-GFP）将荧光增加100倍，并且在好氧条件下，荧光保持稳定数天[ 150 ]。

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