PCR on Worms

PCRonWorms

(adaptedfromMikeKrause)

1.Harvestworms(1plateisplenty)in1-2mlofwaterintoa1.5mlEppendorftube.2.Spin(1min,15,000rpm),andremoveexcesswaterwithoutdisturbingwormpellet.3.Add200uloflysisbuffertowormpellet.Lysisbuffer10mMTrispH8.350mMKCl1.5mMMgCl20.45%Tween0.45%NP40100ug/mlProteinaseK4.Incubateat65oCforonehourwithoccasionalshaking5.Incubateat95oCfor15min(tokillproteinaseK)6.SetupPCRreactionasfollows(mixreagentsonice):DNA(digestedworms)2.0ul10XTaqbuffer5.0ul25mMMgCl23.0ul25mMdNTPs0.4ulPrimer1(50ng/ul)4.0ulPrimer2(50ng/ul)4.0ulH2031.1ulTaq(Promega5u/ul)0.5ul7.CyclePCRreactionasfollowsStep194oC1minStep256oC2minStep372oC5minStep494oC45seCSTep556oC45secStep672oC1min30secRepeatSteps4-634timesStep772oC15min8.Load15ulon1%agarosegel

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