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为了生成人类IgE敲入小鼠,我们构建了两个基因修饰的小鼠胚胎干细胞(ES细胞)。在一个ES细胞基因组中,编码小鼠γ1重链的基因被人ε重链取代(图1)。在另一个ES细胞基因组中,编码小鼠κ轻链的基因被替换为人κ轻链(图1)。将这两种经过修饰的ES细胞移植到假孕雌性小鼠中,然后进行繁殖和交配,以产生同时携带人纯合ε和κ链基因的基因敲入小鼠(HεκKI小鼠)(图1)。这些HεκKI小鼠产生完整的嵌合人IgE抗体分子,其中IgE抗体的可变区是小鼠来源的,而B细胞表达嵌合人IgE。4
在当前用于测量过敏原特异性血清IgE浓度的临床方案中,IgE校准物被用作参考标准,以将测量的化学信号转换为蛋白质浓度。IgE校准物的结合曲线(测量几种已知IgE浓度的回归曲线)是通过类似于夹心ELISA的检测方法建立的。但是,采用与间接ELISA相似的另一种方法检测过敏原特异性血清IgE。令人担忧的是,使用不同的方法来建立参考和测量样品可能会产生不准确的结果。在这方面,我们比较了从这两种方法生成的嵌合人IgE mAb的结合曲线。方法A生成的人IgE和嵌合人IgE mAb的结合曲线重叠。相反,在通过方法A分析的人IgE结果和通过方法B分析的嵌合人IgE mAb中,结合曲线的匹配度很差。两种嵌合人类IgE单克隆抗体的结合曲线Der p 2过敏原也有所不同。这些结果表明检测方法,过敏原性质和抗体克隆(或亲和力)是确定抗体结合曲线形状的影响因素。如果用于建立IgE校准物结合曲线的方法与用于检测过敏原特异性血清IgE的方法一致,则来自IgE校准物的IgE浓度的转换将更加准确和一致。过敏原特异性嵌合人IgE mAb可能满足更好的IgE校准物的要求。

AllerMAbs我们专门生产高亲和力的过敏原特异性嵌合人类IgE单克隆抗体(mAbs)1。我们的主要目标是将嵌合人IgE mAb用于血清IgE测量,以用于临床,尤其是用于校准血清中变应原特异性IgE的量。当前,源自正常血液样品的人IgE抗体被用作用于过敏原特异性血清IgE测量的校准物。但是,由于缺乏对过敏原的特异性,因此难以生成准确的校准曲线。此外,据报道,从正常血液样本中制备的一批人IgE对乙型肝炎表面抗原2呈阳性。。因此,处理人IgE有感染病原体的风险。嵌合的人IgE与人IgE具有一些生化特性。过敏原特异性嵌合人IgE mAb能够识别与过敏原特异性血清IgE相同的过敏原。因此,与非特异性人IgE相比,过敏原特异性嵌合人IgE mAb产生更准确和可靠的结果。我们开发的技术使嵌合人IgE mAb的生产效率更高,并使我们能够有效地提供各种过敏原特异性IgE mAb。我们希望我们的技术和产品将促进与IgE相关领域的研究,并提高临床血清IgE测量的质量。
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(此处以Amsbio为例,实际不同品牌不同产品类型所涉及流程稍有不同)

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