E玫瑰花环形成试验（E Rosette Test）

【原理】 正常人外周血中T细胞在体外能直接和绵羊红细胞（SRBC）结合形成玫瑰花样细胞团，这是因为人的T细胞膜具有能和SRBC膜上的糖蛋白相结合的受体，称为E受体。已证实E受体是人T细胞所特有的表面标志，也是T细胞的常用方法之一。 【材料】 肝素抗凝人外周血1ml 淋巴细胞分层液（见附录）2ml 0.5%SRBC：悬液将脱纤维的绵羊静脉血用Hanks液洗3次，在用Hanks液配制为含压积SRBC为0.5%的悬液（约含SRBC3×10⁷/ml）。 经SRBC吸收及灭活的新生小牛血清（NBS）：取无菌NBS置56℃水浴经30min灭活；取已灭活的NBS2体积，加入经洗涤后的压积SRBC1体积，混匀后置37℃温箱30min，离心沉淀，吸取上层血清即成。 Hanks液；pH7.4（见附录）。 血球计数板、毛细滴管、载玻片、微量加样器、光镜、瑞氏（Wright’s）染液等。 【方法】 1．取肝素抗凝血1ml加1mlHanks液，混匀后用毛细滴管将其加在2ml分层液上。 2．离心2000rpm，30min，用毛细滴管吸取血浆与分层液界面处富含淋巴细胞的悬液置于另一洁净试管中。3．用Hanks液以1000rpm，离心10min洗细胞2次，末次弃上清后再加入Hanks液1ml，混匀，用微量加样器吸取0.02ml加于0.38ml白细胞计数液中，在血球计数板上于低倍镜下计数，并根据下式算出每毫升细胞数。然后用Hanks液配制成10⁷/ml细胞悬液。4．取107/ml细胞悬液0.1 ml加0.1 ml经SRBC吸收和灭活的NBS，再加0.2 ml 0.5% SRBC悬液，混匀，放37℃温箱5 min，然后放4℃冰箱2 h或过夜。5．取出试管，轻轻使沉淀的细胞悬浮，用毛细滴管取出一滴置于载玻片上盖上已滴加瑞氏染液的盖玻片，于高倍镜下观察计数。【结果观察】计数200个淋巴细胞，凡结合3个SRBC以上者为E玫瑰花阳性细胞，求出百分率为T细胞百分比。正常值为68±9.9%。【注意事项】SRBC自绵羊体内取出后限在2周内使用。