《人类染色体技术与原理》翻译共同体

曾建议成立翻译共同体的，得一些战友支持，选此书练笔，一度中止，偶会继续努力！
绒毛组织培养
样本准备：20ml注射器，含6ml无血清RPMI1640及两滴500IU/ml的肝素
将绒毛组织吸入注射器内，再注入皮氏培养皿后，送至实验室处理
1。倒置显微镜下观察，用细镊子将绒毛组织与蜕膜仔细分离，可用HBSS液清洗，将样本分成两等份，一份用于直接法，一份用于培养。
2。直接法：
将皮氏盘内的培养液换成3ml 37 C 预热20%灭活的胎牛血清，1%庆大霉素，放置于5%CO2，100%湿度的培养箱
3。同步化
培养3小时后，加入0.1ml10-5MFUdR 液
孵育15小时
加入0.1ml10-3MThymidine,继续培养5小时
加入0.1秋水仙素至终浓度为10ug/ml，孵育1小时
4。收获细胞
移出培养箱，巴斯德吸管轻轻吸去培养液
慢慢加入3ml1%柠檬酸钠（预热37C），37C孵育20分钟
缓缓加入0.5ml固定液，中止低渗作用
吸去低渗/固定液，边摇边滴加新鲜固定液2ml(甲醇：乙酸，3：1），清洗绒毛组织，吸去固定液，再加入新鲜固定液2ml
冰箱过夜，或20分钟（24小时出结果）
吸去固定液，室温放置约1-2分钟，风干
加入100-200ul60%乙酸液，按样本的多少调整溶液体积大小
倒置显微镜下观察，绒毛组织释放出的游离细胞，轻轻晃动，观察其数目的多少，如满意，继续制片步骤
5。制片
制作专用的“耙子”，用巴斯德吸管，在其未端1英寸处，熔弯成90度角。“耙子”在固定细胞上来回运动，使液体分布均匀
玻片表面加热至45C
加入100ul细胞悬液至已标记的玻片表面，一手拿弯耙，另一手拿玻片，用制好的耙子弯端只与液滴相接触，而勿与玻片表面接触，沿玻片的长将液滴铺开在玻片中间部分（50%-60%），两者相互来回运动3-4次即可，撤去玻片，将剩余的悬液点样，用相差显微镜观察分裂相的分布情况。玻片在孵育炉内干燥。
6。染色
孵育后，玻片冷至室温，用30%的过氧化氢（双氧水）预处理10分钟；取其中一块玻片作胰酶及染色时间的预实验，浸入酶-PBS液（0.2ml胰酶+50mlPBS,pH 6.8)，立即取出，清水漂洗，空干，瑞氏染色3-5分钟，清水漂洗，空干。
注意：
加入FUdR和thymidine的时间可以调整，（15-17h;3-8h)
建议上午8-10AM收集标本，下午3PM加FUdR。

产前诊断羊水细胞的培养产前诊断中羊水是胎儿细胞的主要来源，羊水囊完全包裹胎儿，临床上使用20-22号标准针头连接注射器，在B超辅助下抽取羊水标本--羊水穿刺。妊娠15-16周抽取20-30ml羊水，此期的羊水含丰富的有活力的细胞，可用于细胞培养，在妊娠15周之前，每妊娠周羊水产生量约为1ml左右。羊水细胞呈贴壁生长，可在T型培养瓶内培养达数年之久。对培养载体和培养介质的改进可将诊断时间由2-3周缩至10天。1）盖玻片培养可原位收获细胞2）促进细胞分化增殖的培养液方法：（2。9）T型培养瓶培养1。取两支标记离心管A，B，每管加入10ml 羊水标本2。800rpm,离心10分钟3。记录羊水离心后细胞量的多少，将上清转至另两支消毒管（一管用于AFP的测定，另一管备份保存）4。A管加5ml生长培养液，混匀细胞，转入T25型培养瓶A。（建议培养液初始加入量为3ml,第四天补余下的2ml）。B管加入7ml生长培养液，混匀后，分别转入5m和2ml培养液入培养瓶B和C，第三天或第四天将总量补至5ml。5。CO2培养箱内水平位放置培养瓶A，B，C，A瓶可与BC两瓶分开在不同的培养箱内培养。6。培养4-5天，培养期间将悬浮细胞及培养液转至两支消毒离心管内，每个培养瓶更换新的培液5ml。7。将旧培液及所含的悬浮细胞离心800rpm，10 分钟，弃上清，加入5ml生长培养液，重悬细胞，转入培养瓶D。8。ABCD放入培养箱9。第7天起，每天检查培养瓶AB克隆数目及大小，倒置显微镜下观察培养细胞，如增殖能力良好且克隆充足时，可考虑收获细胞，培养瓶C于第8或9天换液。

续前贴2.10 收获培养细胞（培养瓶）1。加入0.25ml秋水仙素至培养瓶内2。孵育2小时3。移去培养液，存入已标记的离心管4。培养瓶内加入1ml 37C预热的胰酶-EDTA液，振荡洗脱细胞，将液体全部转入盛旧培养液的离心管内5。重新加1.5ml胰酶-EDTA至培养瓶内，振荡洗脱细胞，37C孵育3分钟6。羊水培养细胞从培养瓶表面脱落（如仍未脱落，继续培养2分钟），将离心管内的培液加入培养瓶内，吸嘴混匀，再将细胞悬液转回离心管内。7。800rpm 离心10分钟8。弃上清，以下步骤按方法2.3中的4-9。2.11 盖玻片培养方法1。羊水标本分至两个离心管A，B，800rpm离心10分钟，按方法2。9保存上清2。离心管AB分别加入1.5ml和2.5ml生长培液，混匀，悬浮细胞团块3。在35mm皮氏盘内每张盖玻片加0.5细胞悬液，防止玻片上的液体流出（22m2盖玻片高压灭菌，预先放置在皮氏盘内）4。CO2培养箱内37C孵育24-36小时5。每个皮氏盘内加入1.5新鲜生长培液，继续培养6。第6天，倒置显微镜下观察培养的羊水细胞7。若细胞生长量充足，考虑收获细胞8。如不打算收获细胞，应于第6或7天更换新鲜培液。较为保险的方法：先加1ml细胞悬液至一培养瓶内，加生长培液至总体积5ml，CO2培养箱内37C孵育，若盖玻片法培养细胞出现问题时或其它研究的需要，将其作为羊水细胞备份的来源。

贴一个G带正常核型，给大家一个感性认识！G-banded metaphase spread from a phenotypically normal 46,XY male. X and Y chromosomes indicated by arrows. Chromosomes are stained with Giemsa

玻片小室培养瓶（slide chamber)原位培养1。羊水标本分至两个离心管A，B，800rpm离心10分钟，按方法2。9保存上清2。分别用6-8ml生长培液混匀细胞团块，标记玻片小室，加入2ml悬液3。放CO2培养箱，盖口稍松4。第6天，检查细胞克隆的数目及大小5。收获细胞或每个玻片小室更换2ml生长培液方法2.131。将0.1ml秋水仙素加至皮氏皿或玻片小室内2ml培液中2。孵育2h3。尽量将培液吸干，弃去4。每个培养室加入2ml低渗液5。室温放置20-25分钟6。尽量将低渗液吸干，弃去7。加入2ml新鲜甲醇：乙酸固定液，室温静置5分钟8。弃去旧固定液，加入新固定液2ml9。重复更换固定液2次10。最后一次固定后，按以下不同的方法准备盖玻片：将皮氏皿内固定液弃去，夹起盖玻片，沥干固定液，玻片表面完全变干后，在背面作标记。玻片小室：弃去玻片小室中的固定液，卸下玻片小室培养瓶上半部，下半部相当于玻片，刮去玻片上残余的分隔小室粘合剂，沥干固定液沥干所需的温度及相对湿度是决定培养细胞染色体分布的关键因素，相对湿度50-60%，温度24-27C较好。方法2.14染色体准备1。催熟（Age),50C过夜，或70-80C1小时2。染色方法同方法3.2染色体分析产前诊断的染色体分析至少需要15-20个G带中期染色体，每单倍体细胞至少400条带，细胞至少来源于两份不同的培养细胞，每培养瓶至少制片10张，每原位培养至少制10-15张片，每张片至少作两个核型分析。

请版主给个评价吧！以上部分是关于产前诊断的染色体分析。