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美国TopoGEN公司成立于1991年，是一家诊断公司，由一批在拓扑异构酶领域工作和在基础、临床、应用及相关方面研究经验丰富的研究者创建，为以药物开发为基础的拓扑异构酶和机制研发人员提供创新产品和服务。药物筛选试剂盒可以分析拓扑异构酶活性药物，用于癌症化疗和抗菌方面。TopoGEN公司还能提供原核和真核化验拓扑异构酶 (I型，II，IV和旋转酶)检测试剂盒，体外体内诊断均可应用。TopoGEN公司还提供DNA载体、DNA裂解目标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和相关试剂盒等完整产品线。

TopoGEN在体内拓扑异构酶抑制试验方面具有丰富的经验。这些实验使研究者可以确定新型试剂是否对核的染色体环境中的内源性拓扑有活性。该分析的一个重要好处是，可以使用任何肿瘤细胞或组织来建立测试药物针对特定肿瘤细胞系的临床功效。对于Topo I，我们使用与Topo II基本相同的基本方法。该方法基于从游离DNA物理分离topo / DNA加合物，并使用抗体测量结合的topo I或II。在该分析中，用测试化合物以及阴性对照（无药物）和阳性对照（已知抑制剂）处理组织培养细胞。细胞经过药物处理，并用Sarkosyl迅速裂解，Sarkosyl在共价裂解复合物中捕获DNA内源性拓扑的一部分。去污剂裂解后，将裂解液稀释以完全解离非共价DNA /蛋白质复合物。共价拓扑/ DNA复合物在CsCl梯度上分离（5 M CsCl也可防止离子DNA /蛋白质相互作用）。该梯度分别解析DNA，染色质聚集体和蛋白质。将梯度离心过夜并分级。与DNA峰一致的topo量是共价DNA /拓扑复合物的量度。通过使用topo I或II抗体作为探针，通过免疫印迹测定DNA峰中的拓扑浓度。在没有能稳定可裂解复合物（依托泊苷，喜树碱）的药物的情况下，在DNA峰中只能发现低水平的topo。这对于topo II尤其明显，因为除非使用抑制剂，否则II型酶不会被该方法捕获。相反，即使在没有喜树碱的情况下，topo I的捕获程度也很低。在DNA密度和蛋白质密度下，topo的比率反映了可裂解复合物稳定的相对效率。

套件内容：

-喜树碱（用TG1021 Top1冻干提供）-
依托泊苷（用TG1022 Top2冻干提供）-
沙古糖基（20％）
-拓扑异构酶I的抗体（TG1021 Top1提供）
-拓扑异构酶II的抗体（170kDa形式，由TG提供）
-CsCl储备溶液-
详细说明手册

一般程序：
该方法的概要如下所示。待测试的细胞可以是特定的细胞系，病毒感染的细胞或肿瘤组织。在有利于内源性拓扑活性的条件下培养细胞（定义为有助于细胞生长的生理条件）；因此，内源酶在一系列断裂和重新密封步骤中与DNA模板结合。同时，诸如DNA复制，转录和修复的中心遗传过程正在进行中。然后将细胞用去污剂（Sarkosyl）迅速溶解。重要的是，在将细胞保持在37°C的同时进行裂解；如果在裂解之前先冷却或处理细胞，裂解复合物往往会重新连接并产生阴性结果（见Trask和Muller，1988）。下一步需要从游离蛋白质中纯化DNA。然而，必须避免有机提取或蛋白酶消化。为此，我们使用了阶梯式CsCl梯度。密度步骤旨在从游离蛋白质中分离DNA，并且可以定量回收两者。包含拓扑和DNA的共价复合物沉淀到DNA的位置。众所周知，共价结合的蛋白质可以改变CsCl中DNA的密度，并且密度变化的幅度与蛋白质的总量成正比。在体外，topo I在蛋白质化学计量过量的条件下可能会产生DNA的密度变化（数据未显示）；然而，体内与蛋白质偶联的蛋白质明显更少。实际上，由于以下两个原因，DNA拓扑异构酶在该分析中不会引起基因组DNA的任何密度变化（见下文）。第一，每个DNA分子结合的拓扑蛋白的数量非常低，在这些梯度中，复合物的行为就像游离的DNA（相对于DNA /蛋白质加合物）。其次，梯度非常陡峭，无论如何都无法解决小的密度差异。CsCl离心后，将梯度分级，并使用狭缝或斑点印迹以及TopoGEN开发的抗体通过Western印迹法测量结合和游离topo的量。结合/游离的比率是特定细胞系统中可裂解复合物形成的直接量度。我们发现，在没有抑制剂的情况下，拓扑异构酶很难（如果不是不可能）以可裂解的复合物的形式被捕获在细胞内。因此，任何导致在DNA峰中检测到topo I或II的测试化合物（见下文）最有可能是topo活性剂。然后，体内连接试剂盒使研究者可以评估化合物在不同组织环境中或感染病毒的细胞中对topo I和II的活性。最后，可以在同一实验中结合对topo I和II的分析。在这种情况下，可以使用拓扑异构酶I或拓扑异构酶II的抗体评估拓扑异构酶I的抑制作用。某些药物可能对两种酶都起作用（Trask和Muller，1988）。

盐酸拓扑替康（Hycamtin）说明
Hycamtin（盐酸拓扑替康）是喜树碱的半合成衍生物，是靶向topo I的抗肿瘤药物，是topo I的毒物（诱导裂解复合物）。 

化学名称：（S）-10-[（（二甲基氨基）甲基] -4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉- 3,14-（4H，12H）-二酮一盐酸盐

分子式： C23H23N3O5•HCl

分子量： 457.9

盐酸托泊替康盐酸盐可溶于水，并在213°至218°C时分解分解。TopoGEN提供此试剂作为拓扑异构酶I的对照毒物/抑制剂。对于体外裂解检测，我们建议您在很宽的uM浓度范围内测试该药物；但是，裂解反应受拓扑异构酶的量以及所用测定的类型的强烈影响（SDSK +对比放射性末端标记的DNA对比测试质粒的裂解）。注意，与测量催化活性的测定相比，检测裂解复合物将需要大量的酶。

样品瓶内容：
TG4100已悬浮在10 mM（0.25 ml）的水中，可以使用了。该药物经过了预先测试，并显示可使用来自TopoGEN的纯化的人类拓扑异构酶诱导拓扑分裂。

公司旨在为客户提供高质量的实验外包服务（CRO服务），包括实验方案设计，常规基因工程实验操作，重组蛋白表达与纯化，重组抗体制备，天然蛋白分离与纯化，病毒分离培养等免疫学相关技术服务；同时我们也为工业客户提供部分IVD级别抗体和抗原原料。核心平台：---噬菌体抗体展示技术平台苏州蚂蚁淘生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供极具性价比的重组Vhh抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。---抗体工程技术平台卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，最快能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自蚂蚁淘生物的资深抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。抗体改造技术平台：蚂蚁淘生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。---蛋白表达与纯化服务技术平台蚂蚁淘生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供全面且优质的蛋白表达技术服务。哺乳动物表达平台：目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，远高于市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供高纯度蛋白。昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只...