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★活体技术荧光检测
荧光蛋白标记 | 适用于标记细胞、病毒、基因等，通常使用的是GFP、EGFP、RFP（DsRed）等； |
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荧光染料标记 | 适用于标记抗体、多肽、小分子药物等；常用的有Cy3、Cy5、Cy5.5及Cy7 |
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量子点标记（新的标记方法） | 适用于标记肿瘤，主要应用在活细胞实时动态荧光观察与成像； 量子点（quantumdot)是一种能发射荧光的半导体纳米微晶体，外观恰似一极小的点状物。量子点荧光比有机荧光染料的发射光强的20倍，稳定性强100倍以上，具有荧光发光光谱较窄、量子产率高、不易漂白、激发光谱宽、颜色可调，并且光化学稳定性高，不易分解等诸多优点。 |
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IPTG,X-GalandX-Gluc
©蚂蚁淘
没错！最开始，GoldBiotechnology只生产这三个产品，30年后的今天，Goldbio的产品已经超过3000种，涵盖：
琼脂糖树脂
抗生素
生化试剂
缓冲液
克隆与诱导
培养基添加剂
洗涤剂
DNA蛋白质电泳
酶、抑制剂和底物
生长因子
植物研究
蛋白质表达与纯化
还原剂……
目前Goldbio最核心的产品是：荧光素钾盐，X-gluc，双丙氨磷，草胺磷和X-α-gal
背景：活体成像技术（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的
细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域，最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干
细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
原理：常见的荧光素酶有两种，分别是萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase，编码基因是luc）和海肾荧光素酶（Renillaluciferase，编码基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下，底物被氧化发光（不同底物光的颜色和波长不同），当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。
产品：化学发光底物1：D-Luciferin美国Goldbio公司提供几种常用类型的D-Luciferin，每批试剂都经过严格的质量验证（经9次独立的HPLC和FTIR标准法监测）和发光效率检测，确保客户每次试验的高重复性和成功性。所有产品都可用于体内成像分析和体外化学发光检测实验。Goldbio的D-Luciferin是
合成的萤火虫荧光素，结构与promega公司提供的甲虫荧光素一致，是水溶性的萤火虫荧光素酶底物。DLuciferin,SodiumSalt/D荧光素钠盐分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O。
分子量：320.32g/mol
纯度：高级纯（99.7%）
应用：1）体外化学发光分析（invitro）；
2）活体成像实验（invivo）；
3）高灵敏度ATP分析；
步骤：Protocol1InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测
1）用33.3mL蒸馏水溶解1.0gD-荧光素钠盐，配制成100mM的
储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
2）用组织培养基1∶200稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)。
3）去除培养细胞的培养基。
4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。
Protocol2：Invivoanalysis/活体成像分析
1）用无菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-荧光素钠盐工作液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。
2）注射量取决于注射方式，具体如下：
注射方式剂量静脉注射（25-27gauge针头）按10uL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/mL荧光素工作液腹腔注射（25-27gauge针头）按10uL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/mL荧光素工作液肌肉注射（27gauge针头）50uL，浓度为1–2mg/mL荧光素工作液鼻内注射（pipette）50uL，浓度为3mg/mL荧光素工作液3）注射入体内5-10分钟后，进行成像分析。
（2）D-Luciferin,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐;
分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O 分子量：320.32g/mol 纯度：高级纯（99.7%）
应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；
2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；
Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测
1）配制成100mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
2）用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液，配制工作液(终浓度150μg/mL)。
3）去除培养细胞的培养基直至无残留。
4）图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。
Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠活体成像分析
1）用无菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。
2）按10μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液；
3）腹腔注射10-15min后进行成像分析（对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间
（3）D-LuciferinFirefly,freeacid/D-萤火虫荧光素
分子式：C11H8N2O3S2
分子量：280.330g/mol 外观：白色至浅黄色粉末
溶解：0.25%浓度溶解于甲醇，形成近乎无色至浅黄色的清夜
保存：-15°C避光
应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；
2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；
使用GBT公司荧光素（Luciferin）发表的文献:
1.Barthetal.MolecularTherapy.2008,16.957-964.
2.Mahlleretal.CancerResearch.2008,68(4).1170-1179.
3.Marquesetal.JournalofNeurovirology.2008,14(3).229-238.
4.Stishetal.J.Neurooncol.2008,61(1).51-61.
5.Zhangetal.CancerResearch.2007,67.9389-9397.6.Baia,G.etal,BrainPathology,2007,18(2),172-179.
7.Barth,A.etal,MolecularTherapy,2008,16(5),957-964.
8.SuY.etal.ClinicalandExperimentalMetastasis,2009
化学发光底物2：Coelenterazine
美国Goldbio提供三种coelenterazine类似物，分别是Coelenterazine，Coelenterazineh，Coelenterazine400a。虽然三种都可用于相同实验，但是得到的结果有差异。
Coelenterazine：普遍认为是天然的腔肠荧光素，是海肾荧光素酶（Rluc）的作用底物，具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度，基因报告分析，BRET（生物发光共振能量转移）研究，
ELISA，HTS，组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测。
Coelenterazineh:与Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道，Coelenterazineh的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍，因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。
Coelenterazine400a:是BRET研究中Rluc的首选底物，此腔肠素衍生物在390nm和400nm之间发蓝色光，对GFPacceptor的光发射干扰最小。
（1）Coelenterazine（天然腔肠荧光素）
分子式：C26H21N3O3 分子量:423.48g/mol 纯度：95% 保存：-15°C避光，保存在惰性气体下
Protocol：发光检测实验
1）使用管光度计室温下定量检测发光情况，每个样品做三个平行；
2）加入底物10s内立即检测，“integrationtime”为1s；
3）对于细菌表达Gluc系统，甲醇溶解底物腔肠素制备10mM储存液，终浓度为10μmol/L。储存液-20°C保存，工作液制备过程需避光并置于冰上。
（2）Coelenterazine400a/腔肠素400a
分子式：C26H21N3O 分子量：:391.48g/mol 纯度：95%
储存液制备：
1）开封前将瓶子放到室温温育，以避免产品发生任何的冷凝；
2）用125μL无水乙醇溶解50μgCoelenterazine400a，最终浓度是0.4μg/μL.，轻轻混匀：避免用DMSO或其他溶剂来溶解腔肠素400a，因为试剂可能被氧化）
3）分装后避光保存在-20°C，保持干燥；
（3）Coelenterazineh/腔肠素h（fromCaliperLifeScienceInc.）
RediJectCoelenterazineh为即用的注射型生物发光底物，特别设计用于体内成像研究。通过最小化产品成分的变化，最小化冻融次数和严格控制不同批次的产品，使用Caliper公司的Coelenterazineh能确保客户得到高重复性的结果。
优 点：
1）预制配方，不同批次间严格控制特别设计用于体内研究；
2）即用型产品通过最小化预成像准备步骤，减少时间和精力；
3）每瓶可用于5只动物的成像研究；（10瓶/kit）
4）经IVIS成像系统验证，控制体内成像质量；
颜色：黄色溶液（溶于丙二醇/柠檬酸盐）
浓度：150μg/mL（10瓶无菌溶液，每瓶含1.2mL浓度为150μg/mL的Coelenterazineh）
保存：Storeat≤-70°C。
使用及注射剂量：
开始实验前，37°C
水浴锅解冻，避免重复冻融。静脉注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)。
1）静脉注射：推荐使用剂量15μg/mouse(100μL/mouse），用1ml注射器直接从瓶内吸取溶液，然后用25gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。
2）腹腔注射：推荐剂量是30μg/mouse(200μL/mouse)。
| 品名 | 目录号 | 价格 |
| D-Luciferin,SodiumSalt | LUCNA-100 | 1400 |
| D-Luciferin,SodiumSalt | LUCNA-500 | 4000 |
| D-Luciferin,SodiumSalt | LUCNA-1G | 6000 |
| D-Luciferin,PotassiumSal | LUCK-100 | 1400 |
| D-Luciferin,PotassiumSal | LUCK-500 | 3000 |
| D-Luciferin,PotassiumSal | LUCK-1G | 49000 |
| D-LuciferinFirefly,freeacid | L-123-100 | 1400 |
| D-LuciferinFirefly,freeacid | L-123-500 | 3000 |
| D-LuciferinFirefly,freeacid | L-123-1G | 49000 |
| Coelenterazine | CZ1 | 1900 |
| Coelenterazine | CZ5 | 3800 |
| Coelenterazine | CZ10 | 4600 |
| Coelenterazine400a | C-320-1 | 2200 |
| Coelenterazine400a | C-320-5 | 6400 |
| Coelenterazine400a | C-320-10 | 1200 |
