eBioscience多因子细胞和组织样本裂解处理方法

细胞样本裂解方案：
►  贴壁细胞裂解方法

1. 培养1×10⁶-1×10⁷个细胞；

2. 使用胰酶消化收集细胞；

3. 将收集好的细胞转移至15ml圆形离心管，4ºC, 500g离心5min；

4. 小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4ºC, 500g离心5min；重复步骤4；

5. 尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

6. 在上步骤获取的细胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer（EPX-99999-000）。

7. 吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；

8. 将所有细胞转移到1.5ml离心管；

9. 4ºC, 14000g（离心机最大转速）离心10min；

10. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºc;

11. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。25ul细胞裂解液样本加入25ul Universal Assay Buffer（EPX-11111-000），作为一个样本加入到样本孔中。
 

►  悬浮细胞裂解方法

1. 培养1×10⁶-1×10⁷个细胞；

2. 将细胞转移到15ml圆形离心管，4ºC, 500g离心5min；

3. 小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4ºC, 500g离心5min；

4. 尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

5. 在上步骤获取的细胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer（EPX-99999-000）。

6. 吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；

7. 将所有细胞转移到1.5ml离心管；

8. 4ºC, 14000g（离心机最大转速）离心10min；

9. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºC。

10. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer（EPX-11111-000）。

建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。

1． 收集组织样本-脾脏、肺、脑、肾脏、肝脏和心脏组织，称重。

2． 按照每100mg组织加入500ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer （EPX-99999-000）。

3． 使用研磨、机械匀浆器、磁珠裂解等方法将组织进行裂解匀浆；

4． 4ºC，16000g 离心10min；

5． 将上清转移到新离心EP管中。

6． 使用蛋白定量试剂盒对上清进行蛋白定量。

7． 使用1*PBS把样本进行稀释到10mg/ml；

8． 按照多因子检测试剂盒Protocol进行检测。样本孔加入25ul Universal Assay Buffer（EPX-11111-000）和25ul 稀释后的组织上清液。