eBioscience多因子细胞和组织样本裂解处理方法

细胞样本裂解方案：
► 贴壁细胞裂解方法

1.培养1×10⁶-1×10⁷个细胞；

2.使用胰酶消化收集细胞；

3.将收集好的细胞转移至15ml圆形离心管，4ºC,500g离心5min；

4.小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4ºC,500g离心5min；重复步骤4；

5.尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

6.在上步骤获取的细胞中，加入200ulProcartaPlexCellLysisBuffer（EPX-99999-000）。

7.吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；

8.将所有细胞转移到1.5ml离心管；

9.4ºC,14000g（离心机最大转速）离心10min；

10.将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºc;

11.按照多因子检测试剂盒操作方法检测。25ul细胞裂解液样本加入25ulUniversalAssayBuffer（EPX-11111-000），作为一个样本加入到样本孔中。
 

►  悬浮细胞裂解方法

1.培养1×10⁶-1×10⁷个细胞；

2.将细胞转移到15ml圆形离心管，4ºC,500g离心5min；

3.小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4ºC,500g离心5min；

4.尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

5.在上步骤获取的细胞中，加入200ulProcartaPlexCellLysisBuffer（EPX-99999-000）。

6.吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；

7.将所有细胞转移到1.5ml离心管；

8.4ºC,14000g（离心机最大转速）离心10min；

9.将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80ºC。

10.按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ulUniversalAssayBuffer（EPX-11111-000）。

建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlexCellLysisBuffer调整样本蛋白浓度方为4-8mg/ml。

1．收集组织样本-脾脏、肺、脑、肾脏、肝脏和心脏组织，称重。

2．按照每100mg组织加入500ulProcartaPlexCellLysisBuffer（EPX-99999-000）。

3．使用研磨、机械匀浆器、磁珠裂解等方法将组织进行裂解匀浆；

4．4ºC，16000g离心10min；

5．将上清转移到新离心EP管中。

6．使用蛋白定量试剂盒对上清进行蛋白定量。

7．使用1*PBS把样本进行稀释到10mg/ml；

8．按照多因子检测试剂盒Protocol进行检测。样本孔加入25ulUniversalAssayBuffer（EPX-11111-000）和25ul稀释后的组织上清液。