【专题讨论】糖生物学第五期讨论话题：CE与糖分析

非常忙，周末才有时间上线，版主给的议题非常的好，糖基化是转录后修饰的一种，而目前由于单克隆抗体药物在国内以及国际上是最热的热点，而因为在未来5-10年很大一批单抗的药物都要专利到期，其中包括 美罗华 等重磅炸弹，笔者以前做小分子药物的，最近才开始接触生物制药这个部分，相比于那些一直在PROTEOMIC领域的专家算是半路出家，但是经过2个月的文献以及基础知识的普及，对于GLYCOSYLATION方面有一个大概的认识，CHO SP2 哺乳动物细胞培养，然后经过分离纯化，protein A 色谱纯化，到最终的终产物，单抗药物，其中质量控制的关键是如何保证批次的一致性，以及与原研药物的一致，氨基酸序列，二硫键，以及糖基化糖型，其中糖基化对于药物的ADCC 效用对主要，BIO-BETTER的典型是EPO-GAMMA，alpha,国际上第二大仿制药巨头SANDOZ(诺华旗下）已经在欧洲成功上市生物仿制药，欧盟已经出台指导原则，而国内目前对于这方面是空白。糖基化分析，以前主要是NP-HPLC，也就是经过荧光标记，然后正相色谱分析，但是目前的主流是HILIC模式去分析，而国际上做这个做的比较好的平台是WATERS，以前会用TSK AMIDE-80的传统色谱分离，目前会用小颗粒的UPLC沃特世的柱子去分离，关于为什么要采用HILIC 而不用其他的手段，我咨询过一个BOSTON CHILREN HOSPITAL那边的同行，他的意思是，第一CE虽然分离要比HPLC好很多，可以CE的重复性不行，在工业化控制上不可行，但是在analy chem 的文章，基因泰克一直采用CE-LIF-MS去分析，而GRAPHITE COLUMN在ISOMER的分析很好，可是因为分离机制以及重复性没有HILIC好，目前还是以HILIC模式为主 我在生物方面算是外行，目前仅仅以分析化学的角度来对这个进行描述，如果有不足之处可以指出来The role of Glycosylation in therapeutic Antibodies.pdf(714.43k)Strategies and challenges for the next generation of therapeutic antibodies.pdf(323.49k)Trends in Glycosylation Glycoanalysis and Glycoengineering of Therapeutic antibodies and Fc-fusion proteins.pdf(988.98k)Structural characterization of immunoglobulin G antibodies with L.pdf(4035.31k)

和小分子化合物不同，在大分子蛋白方面，质量控制一直是一个难点，特别是糖基化分析，糖类首先在紫外没吸收，没有荧光，一般情况会用2-AB 2-AA进行荧光标记，然后进行CE 或者是HPLC进行分析。而唾液酸的不稳定性，在MALDI分析中会失去，这也是一个问题，希望一种TOP-DOWN的模式，稳定，可重复性，可靠的对糖基化的糖型进行分析，也是目前的难点这里有一些文章，大家如果觉得有用可以下载Bioanalytical Applications of Capillary Electrophoresis.pdf(120.54k)analysis of biologically active amines by CE.pdf(374.64k)type N-glycoproein and differential oxidation in glycoproteins by charge reversal and protease glycosidase digestion.pdf(172.01k)Analysis of Intact Glycoprotein Biopharmaceuticals by CE.pdf(1938.12k)CE-LIF fluorescence excitation wavelength optimization for polysaccharides analysis.pdf(1360.36k)

感谢版主置顶。我上传一个国内早期的经典综述。多糖类药物的毛细管电泳分析方法及其应用多糖类药物的毛细管电泳分析方法及其应用.pdf(346.9k)