【求助】western的阳性对照一般用什么？

我刚接触western这种实验方法不久。只知道阴性对照是不加一抗。那么阳性对照应该是怎么设计的？是直接用纯的目的蛋白吗？如果是的话一般都是需要购买吗？或者是还有别的办法。谢谢大家的帮助！！

有纯化的目的蛋白最好了,也可以用细胞裂解或组织匀浆或研磨的提取物,但这个提取物要确定是表达你的目的蛋白,阳性对照的目的就是看看你的一抗是否有问题,如果阳性对照和样品都没有条带,狠可能是一抗不能work,或是一抗以后的步骤出了问题.如果阳性对照有条带,而样品没有,则是你的样品不表达这个蛋白,或是表达量狠低,不在检测范围之内.

好的，明白了，谢谢帮助！！

展开引用iris_palm 有纯化的目的蛋白最好了,也可以用细胞裂解或组织匀浆或研磨的提取物,但这个提取物要确定是表达你的目的蛋白,阳性对照的目的就是看看你的一抗是否有问题,如果阳性对照和样品都没有条带,狠可能是一抗不能work,或是一抗以后的步骤出了问题.如果阳性对照有条带,而样品没有,则是你的样品不表达这个蛋白,或是表达量狠低,不在检测范围之内.......请教版主：多低就检测不出啦？我的靶蛋白表达量很低，正在犹豫要不要做WB，看文献有4篇吧，都是做的IHC

展开引用iris_palm 有纯化的目的蛋白最好了,也可以用细胞裂解或组织匀浆或研磨的提取物,但这个提取物要确定是表达你的目的蛋白,阳性对照的目的就是看看你的一抗是否有问题,如果阳性对照和样品都没有条带,狠可能是一抗不能work,或是一抗以后的步骤出了问题.如果阳性对照有条带,而样品没有,则是你的样品不表达这个蛋白,或是表达量狠低,不在检测范围之内.......请教版主：多低就检测不出啦？我的靶蛋白表达量很低，正在犹豫要不要做WB，看文献有4篇吧，都是做的IHC