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QIAGEN旗下子公司SABiosciences日前推出了信号通路分析工具Cignal™ Reporter System。这一产品线利用经过改造的转录因子报告基因,可快速、灵敏且定量地测定信号通路的激活,目前有DNA和慢病毒导入形式可供选择。
Cignal™ Reporter System包括:
单个通路的DNA型报告基因 – 立即可转染的报告基因
单个通路的慢病毒型报告基因 – 立即可转导的慢病毒颗粒
Cignal Reporter Array – 10条或45条通路的同时测定
基于细胞的通路信号活性分析
Cignal™ Reporter Assay利用双萤光素酶或绿色荧光蛋白(GFP)报告基因系统,测定下游转录因子的活性,从而快速、灵敏且定量地评估信号转导通路的激活。
双萤光素酶形式是一个终点(endpoint)分析,具有卓越的灵敏度、特异性和信噪比。所有Cignal Reporter Assay都有此形式可供选择。每个分析包含了通路聚焦的转录因子报告基因,不可诱导的阴性对照,以及萤光素酶和GFP阳性对照。
GFP形式则是监控活细胞通路调控的理想方法,具有单细胞分辨率。目前部分Cignal Reporter Assay具有此形式。它包含通路聚焦的转录因子报告基因,以及必需的阴性和阳性对照。
Cignal Reporter Assay目前有单条通路分析或多条通路阵列可供选择,让您能监控单条通路或全面了解生物过程中所涉及的多条通路。这些报告基因分析是了解基因功能,以及确定蛋白、肽段及小分子化合物作用机制的宝贵工具。
Cignal Reporter Assay究竟是如何工作的?请看下图。
Cignal Reporter Assay包含立即可转染的通路报告基因、阴性对照和阳性对照。可诱导的报告基因和不可诱导的阴性对照平行转染,经过相同的实验处理。
任一种哺乳动物细胞中信号通路的测定
对于难转染的细胞,Cignal Lenti Reporter Assay可能是一个好选择。它是立即可转导的慢病毒颗粒,实现了任一种哺乳动物细胞中信号通路的测定。通路特异的报告基因利用了经过实验验证的转录因子反应元件,这些元件位于生物发光或荧光报告基因的上游。
Cignal Lenti Reporter系统将转录因子报告基因技术与慢病毒导入力量相结合。这些报告基因是功能基因组学和药物开发中评估通路活性的强有力工具。当通路被候选药物、基因knockdown(利用siRNA)、过表达事件(表达载体)或肽段激活或抑制时,萤光素酶或GFP报告基因的活性被调控,可快速、定量地测定。Cignal Lenti Reporter经过特别设计,可在您的实验室中安全使用。
多条信号通路的分析
有时,我们想了解哪些信号通路对基因过表达/knockdown或化学处理产生响应。这时,Cignal Finder Array就是一个理想工具,它包含了10条或45条生物学相关的通路报告基因。通过测定萤光素酶活性,Cignal阵列在单个实验中实现了多个通路的全面分析。
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QIAGEN旗下SABiosciences在通路特异性基因表达研究领域一直独占鳌头,其开发的第二代功能分类基因芯片(Real-time PCR芯片),结合了实时定量PCR的优点,可在一次实验中准确定量检测上百个基因的mRNA水平,将基因芯片的检测精度提高到与实时定量PCR相当的水平。产品设计中凝聚了生命科学各个研究领域的最新成果,对基因进行了有目的的筛选与分类,从而避免了高通量基因芯片因数据过多而难以分析的缺点。 实时定量PCR芯片:灵敏度高,样品的使用量低,每张芯片使用的总RNAzei少可为0.5ng;观察范围广,可观察到的动态线性范围超过105,可以同时检测表达量差异较大的基因;重复性高,Ct值的平均差异只有0.25个循环;分辨率高,可检测超过两倍的基因表达量变化;特异性好,PCR扩增产物条带单一。