卡托普利片中卡托普利二硫化物含量的测定

原标题：超高效液相色谱法测定卡托普利片中卡托普利二硫化物含量

摘要采用超高效液相色谱法测定卡托普利片中卡托普利二硫化物的含量。用WatersAcquityUPLCBEHC18色谱柱，以乙腈–水(pH3.0)为流动相，流速0.2mL／min，进样量为5μL，外标法以峰面积定量。卡托普利二硫化物的质量浓度在0.2~10μg／m范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，r>0.99995，峰面积测定结果的相对标准偏差为0.65%(n=6)，加标回收率为98.9%，二硫化物与主峰的分离度大于6.0。用该法对4批样品进行检测，卡托普利二硫化物含量为0.3%～3.8%。与常规液相色谱法比较，该法分离效率高，重复性好，可用于卡托普利片的质量控制。

中图分类号：O657.7文献标识码：A文章编号：1008–6145(2015)04–0036–04

DeterminationofCaptopril-DisulphideinCaptoprilTabletsbyUltra-Performance

LiquidChromatography

TanJinfeng,MaYunyun

（1.WeifangEnvironmentalMonitoringCenter，Weifang261041,China;

2.WeifangInstituteforFoodandDrugControl，Weifang261041,China)

AbstractUltra-performanceliquidchromatographicmethodforthedeterminationofcaptopril-disulphideincaptopriltabletswasestablished.ThemethodwasperformedonaWatersAcquityUPLCBEHC18analyticalcolumnandthemobilphaseconsistedofacetonitrile–H2O(pH3.0)withflowrateof0.2mL／min.Theinjectionvolumewas5μLandthecontentwasquantitedbytheareaofthedisulphidepeakwiththestandardcurve.Theconcentrationofcaptopril-disulphidewaslinearwiththepeakareaintherangeof0.2–10μg／mL,r=0.99995.Therelativestandarddeviationofareadetectionresultswas0.65%(n=6).Theaveragerecoverieswas98.9%,thepeaksofcaptoprilanddisulphidewerewellisolatedandthechromatographicseparationdegreewasmorethan6.0.Themethodwasusedfordetectingfourbatchesofsamples,andtheresultswereintherangeof0.3–3.8%.Comparedwithroutineliquidchromatography，thismethodhashighseparationandgoodrepeatABIlity，whichcanbeusedforthequalitycontrolofcaptopril.
KeywordsUPLC;captopril–disulphide;contentdetermination;qualitycontrol;rapidtest

卡托普利片为抗高血压药物，是血管紧张素转化酶抑制剂，临床上被广泛应用，属于国家基本药物目录品种。制剂中卡托普利二硫化物(以下简称二硫化物)是一种已知杂质，目前行业内普遍采用《中国药典》规定的高效液相色谱法测定，外标法定量。按照《中国药典》中的色谱条件测定二硫化物出峰慢、峰形差、理论板数低、使用大粒径填料、耗时、难以快速定量，即使采用梯度洗脱也需运行
35min［2］梯度洗脱较等度洗脱重现性差。目前中国药典中药品快速检验技术不断增加，在测定卡托普利片中卡托普利二硫化物时需要有效手段快速分离二硫化物并准确定量。超高效液相色谱法在药物分析、食品检测、环境监测等方面的研究已有不少报道［4–15］，但目前还未见采用超高效液相色谱法测定卡通托普利中二硫化物的报道。笔者采用该法建立了二硫化物的快速分析方法，方法操作简便，结果准确，分离度与重复性好，分析效率高，可为卡托普利质量控制提供参考方法。

1实验部分

1主要仪器与试剂

液相色谱仪：WatersAcquityTMUPLC型，配有高压泵，双波长紫外检测器，自动进样器，柱温箱，EmpowerPro色谱工作站，美国
Waters公司；

电子天平：AX205型，瑞士Mettler-Toledo公司；

超纯水仪：Integral3型，法国Millipore公司；

数控超声波清洗器：KQ–700DV型，昆山市超声仪器有限公司；

无菌滤膜：0.2μm；

移液器：100μL，1mL；

卡托普利：批号100318–201105，含量99.5%，中国食品药品检定研究院；

卡托普利二硫化物：批号100319–201105，含量为100.0%，中国食品药品检定研究院；

卡托普利片：由A、B、C3家生产企业提供，A企业有2个批次，规格均为25mg；

乙腈：色谱纯，美国FisherScientific公司；

实验用水为自制超纯水(电阻率为18.25MΩ·cm)；

实验用其它试剂均为分析纯。

1.2色谱条件

色谱柱：WaterAcquityUPLCBEHC18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相：乙腈–水(体积比为25∶75，以磷酸调节pH为3.0)，流速为0.2mL／min；柱温：35℃；检测波长：215nm；进样体积：5μL。

1．3溶液配制

1.3.1对照品溶液

避光精密称取二硫化物12.51mg，置于25mL棕色量瓶中，加甲醇振摇溶解后定容，作为对照品储备液，于4℃冰箱避光保存。精密称取10.33mg卡托普利样品于100mL棕色量瓶中，精密加入3mL二硫化物储备液，用流动相溶解定容，作为系统适用性试验溶液。

1.3.2供试品溶液

取样品10片称量，避光研细，精密称取细粉适量(相当于卡托普利25mg)，置于50mL量瓶中，2．5线性关系、检出限与定量限加入约25mL流动相振摇10min，用流动相定容后摇匀，备用。

2结果与讨论

2．1供试品溶液制备方法

优选了不同提取条件制备供试品溶液，采用不同提取方式(超声、振摇)，不同振摇时间(5，10，15min)，最终确定振摇10min，此条件下二硫化物基本提取完全，且振摇不会升温，比超声提取法更加温和，可避免不当前处理造成的正误差，方法简单，成
本较低。

2.2流动相

在流动相的筛选过程中，考察了甲醇–磷酸盐缓冲液、乙腈–磷酸盐缓冲液(1gNaH2PO4溶解到1L水中，磷酸调pH为3.0)、乙腈–水(以磷酸调节pH为3.0)等度洗脱。试验发现在相同配比、流速的条件下，甲醇洗脱体系的洗脱效率不如乙腈体系而压力却更高，采用水代替磷酸盐缓冲液色谱峰变化不大，故选择乙腈–水为流动相，利于保护色谱柱。流动相中有机相的比例变化对二硫化物的保留时间及其与主峰的分离度影响较大，乙腈含量为30%时，分离度低于4.0；降低乙腈含量至25%时，分离度达到6.0，满足药典要求；若再降低至20%，虽然分离度增至8.7，但出峰时间延长约1倍且理论塔板数降低约一半。故采用25%乙腈，出峰时间合适，分离度和理论板数较高，柱压较小。

2．3流动相流速

在流动相为乙腈–水(体积比为25∶75)、柱温为35℃的条件下，比较了0.1，0.2，0.25，0.3mL／min不同流速对色谱分离的影响。虽然二硫化物的保留时间随流速升高而缩短，但与主峰的分离度以及峰面积与理论板数都会降低，另外柱压较高，容易超限
液，故最终选择流动相流速为0.2mL／min。

2．4色谱系统适用性

取对照品溶液、供试品溶液及稀释样品的流动相(作为空白样品溶液)各5μL注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算二硫化物的含量，色谱图见图1。由图1可知，空白样品溶液色谱图中在被测组分峰位上没有吸收峰，故对测定无干扰。二硫化物保留时间约为4.2min，约为主峰的2倍，与主峰的分离度大于6.0，单针运行5min即可，理论踏板数按二硫化物计算不低于5000，脱尾因子在0.9～1.0之间，峰形良好。

 2．5线性关系、检出限与定量限

移取二硫化物对照品储备液适量，加入流动相稀释配制成0.2，0.5，1，2，5，10，20μg／mL的对照品标准溶液系列。分别取5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积Y对各对照品浓度X(μg／mL)进行线性回归，得到的回归方程为Y=30618.8X–1230.2，相关系数r=0.99995，表明二硫化物浓度在0.2～10μg／mL的范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

将0.2μg／mL二硫化物对照品溶液用流动相逐级稀释后进样测定，得到二硫化物的检出限LOD(S／N=3)为0.1μg／mL，定量限LQD(S／N=10)为0.2μg／mL。

2．6精密度试验

取同一供试品溶液连续进样6次，峰面积测定结果见表1。由表1可知，二硫化物峰面积测定结果的相对标准偏差为0.65%，表明方法精密度良好。

2．7加标回收试验

取已知二硫化物含量的卡托普利片细粉6份(二硫化物含量为0.0049g／g)，每份约80mg(平均片重为83.4mg)，精密称定，置于50mL容量瓶中。分别精密加入1mL二硫化物储备液，加标量为0.5mg，按1.2.2方法制备供试品溶液，依法测定并计算回收率，结果见表2。由表2可知，二硫化物

平均回收率为98.9%(n=6)，表明方法准确度良好。

2．8样品测定

采用所建方法对来自3家企业的4批卡托普利片样品(A1，A2，B，C)进行测定，二硫化物质量浓度测定结果见表3。由表3可知，有一批检出二硫化物含量占标示量的3.8%，为不合格批次(药典规定二硫化物的限度为不得超过标示量的3.0%)。

3　结语

建立了超高效液相色谱法测定卡托普利二硫化物含量的方法，该法测定二硫化物保留时间稳定，测定结果准确、精密度高、回收率符合检测要求。与常规液相色谱法比较，超高效液相色谱的分析时间大幅缩短，分离效率高，重复性好，溶剂用量少。该法可作为实验室方法改进的参考依据，可用于卡托普利片的质量控制。

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作者：谭金峰1，马云云2

(1.潍坊市环境监测中心站，山东潍坊261041；2潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊261041)

摘自：《化学分析计量》