ThermoSequenaseCycleSequencingKit允许同等高效地将ddNTP和dNTP加入循环测序反应,产生非常均匀的条带强度,具体强度值可以准确读出。使用该
试剂盒可选择带有内部标记的三dNTP延伸
引物法,或者5’端标记的引物法。
获得高质量序列
类似于SequenaseDNAPolymerase,ThermoSequenase生成具有均匀条带强度的序列,并且TaqDNA聚合酶的条带强度不会发生变化。
灵活标记
该款试剂盒适合使用标记的dNTP或5’端标记的引物进行内部标记。
使用更少的模板
只需5fmol的单链或20fmol的双链模板即可。
通读二级结构
带有回文结构、发夹结构或重复碱基的区域更容易使用ThermoSequenase和循环排序方法进行解析。
使用7-deaza-dGTP
核苷酸混合物解析凝胶压缩
当DNA使用7-deaza-dGTP而不是dGTP
合成时,形成的二级结构更弱,因此会减少排序凝胶中的压缩假象。
使用焦磷酸酶消除弱条带
弱条带偶尔会伴随反应或循环时间延长而出现。这是由聚合酶催化的序列特异性焦磷酸解引起的。添加焦磷酸酶可最大程度减少焦磷酸解,并可防止弱条带强度引起碱基读取不正确。
ImportantNotes:
该款试剂盒中的ThermoSequenaseDNAPolymerase配方需要使用甘油耐受型DNA测序凝胶,以消除在引物以外大约350至600碱基位置发生甘油诱导性条带失真。使用信息在试剂盒实验方案中提供。如果该区域超出您的读数范围,则可以使用Tris-Borate-EDTABuffer(TBE)。
References:
TABOR,S.ANDRICHARDSON,C.C.(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA92,p.6339-6343.
SAMOLS,S.B.,MCARDLE,B.F.,RUAN,C.C.,VANDERHORN,P.B.ANDFULLER,C.W.(1995)Comments22,No.2,UnitedStatesBiochemicalCorp.,Cleveland,OH.
RUAN,C.C.,SAMOLS,S.B.ANDFULLER,C.W.(1990)Comments17,No.1,UnitedStatesBiochemicalCorp.,Cleveland,OH.
TABOR,S.ANDRICHARDSON,C.C.(1990)J.Biol.Chem.265,6447-6458.