【原创】腺病毒纯化经验交流：附Cscl纯化资料，免叮当

重组腺病毒纯化终于成功，特来分享经验。
我用的包装系统是AdMax System，Microbix Biosystems公司。

重点谈谈纯化过程，让后来人少走弯路。权当抛砖，如有不当之处，请园内高手指正。
时至今日，Cscl密度梯度离心纯化腺病毒依然是最经典，最可靠的纯化方式。相比离子交换等试剂盒纯化方法得到的腺病毒，往往有活性的病毒比例比较低。按照分子量大小不同或者密度不同的方法来分离腺病毒颗粒能区别病毒空壳，得到更多有活性的病毒颗粒。
因此，莫贪图省事，只要做好功课，Cscl法只是纸老虎~

具体操作方法各执一词，其实大同小异，相信都是有人做出来过的，不做评价，只谈我所用的，比较简洁的方案。
一.不连续梯度离心,其实两个梯度足矣，分别为
1.25 g/ml density，
1.4 g/ml density，
离心后病毒条带位于两层梯度交界处。
二.连续梯度离心,仅配一个密度的Cscl，
为1.34g/ml density，
离心后会形成一个围绕1.34g/ml的连续Cscl梯度，（病毒带的密度大约为1.345，空壳病毒在它之上）。
具体操作见附件protocol。

注意：以上数值均为密度，而非m/v浓度，密度与浓度的换算的公式为（参考附件1 Cscl 说明书）：
To prepare a CsCl solution ofaparticular density , the percent by weight of CsCl can be calculatedby the formula:
% wt/wt =137.48 –138.11/ρ
where ρ is the desired density. For example, for ρ =1.7 g/mL, use 56.24 g CsCland 43.76 mL H2O.
通过该公式，我们可以任意配各种密度的Cscl。
如果要想换算成m/v（g/ml）可以，比较符合平时配试剂的习惯，容我啰嗦两句。
密度ρ=Cscl+H2O总质量/体积。假设密度ρ的溶液m/v浓度浓度=a g/ml，配1ml该液需要Cscl a g，H2O 所需的量 =( ρ× 1ml – a)。带入上面的公式:
% wt/wt= 100×a/(a+( ρ× 1ml - a))=137.48 –138.11/ρ，
可得出 a的值，以后想配多少ml就配多少ml了~~~
不过，不想算，图方便的，见protocol，附件二，Adenovirus production ，纯化，斯坦福。

另：我们实验室的的方法最接近这个protocol（特指纯化部分，part K），而有些具体情况可能每个实验室习惯不一样。下面是我们的改动部分
1. 病毒保存液，和Cscl稀释液，以及透析液的种类繁多。我们用的10%甘油的PBS，再简单不过。
2. 我们没用mineral oil
3. 我们没用注射器穿刺，而直接自上往下用枪吸的，有难度。这一点不建议模仿，原因很悲剧，老师不让用。

给有需要的人，祝你顺利。