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DNA损伤的三种分子生物检测方法——苏州蚂蚁淘

DNA是携带生物体遗传信息的重要分子,它的完整性对细胞存活至关重要。然而,在生命活动中,DNA时刻遭受着内源性(氧化自由基、复制叉崩塌等)或外源性(电离辐射、烷化剂等)刺激,DNA损伤不可避免。

检测DNA损伤的方法有很多,根据其原理大致可以分为3类:基于损伤DNA理化性质的改变检测DNA损伤、基于分子杂交检测DNA损伤以及基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤。前两种方法是基于荧光标记直接观测DNA的损伤情况,而基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤是通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。


DNA损伤过程中可形成某些特定的损伤产物,可通过检测损伤产物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)来评估DNA损伤。也可标记损伤DNA,如末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL),通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。

1.双链断裂标志物磷酸化H2AX检测法

H2AX是组蛋白H2A家族成员之一,包含一个进化保守区域SQ位于真核细胞的C末端,分子量为14KD,139位有个丝氨酸残基,在细胞发生DNA双链断裂后的数分钟内,将会被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成H2AX,进而迅速招募DNA修复蛋白和凋亡蛋白到损伤部位,每个双链的断裂区会有成百上千的-H2AX,然后在1h左右数量和密度达到峰值。由于H2AX的出现与DNA双链断裂紧密关联,是目前国内外研究细胞DNA双链断裂应激反应的热点之一,同时也可以作为DNA双链断裂的标志物。

由于与DNA双链断裂紧密相关,H2AX可以作为双链修复的标志物,艾美捷可为您提供完备的H2AX检测产品:

H2AX检测试剂盒


P-6001-096EpiQuikInSituDNADamageAssayKit
原位DNA损伤检测试剂盒通过原位检测磷酸化H2AXSer139评估DNA损伤96assays
MAB20144H2AFXmonoclonalantibody,cloneBIA-8WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP
MAB12802HistoneH2AXmonoclonalantibody,cloneRM214WB-Ce、ICC、ELISA
MAB15279HistoneH2AX(phosphoS139)monoclonalantibody,clone2A9-B5WB-Ce、IF
MAB15111HistoneH2AX(phosphoS139)monoclonalantibody,cloneRM224WB-Ce、ICC、IF
MAB21809H2AFX(phosphoS139)monoclonalantibodyWB、IHC-P、IF、IP

DNA氧化损伤产物中,作为DNA中脱氧鸟苷(dG)的羟基加合物,8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)因其形成量大,影响因素少,已被公认为最能反映体内DNA氧化损伤程度的生物标志物。

OHdG检测试剂盒:


P-6003-48EpiQuik8-OHdGDNADamageQuantificationDirectKit(Colorimetric)
8-OHdGDNA损伤定量检测试剂盒(比色法)48assays

原位末端标记法(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)是一种检测凋亡细胞DNA链断裂片段的方法。细胞凋亡发生时,内源性核酸内切酶将DNA降解成片段,在脱氧核苷酸末端转移酶的作用下,底物dUTP或BrDU(无或有荧光标记)可连接到DNA断片的3-OH末端,采用荧光显微镜流式细胞仪对标记物进行分析,实现在单细胞水平检测凋亡细胞的DNA碎片。


KA0775InSituBrdUDNAFragmentationAssayKit(IHC)细胞、组织
KA0776InSituBrdUDNAFragmentationAssayKit(Red)细胞、组织

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