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Gene Tools生产Morpholino反义寡核苷酸吗啉代寡核苷酸与互补RNA结合并阻碍了加工过程。它们可以降低基因表达,修饰RNA剪接或抑制miRNA活性和成熟。Morpholinos是发育生物学实验室中使用的主要敲低工具,是培养中细胞的最佳RNA阻断剂,而Vivo-Morpholinos则是其他动物模型中最特异性的增强递送的寡核苷酸。我们是在全球范围内销售Morpholinos研究数量的唯一商业制造商。

Morpholino寡核苷酸是约25个Morpholino亚基的短链。每个亚基由核酸碱基,亚甲基吗啉环和非离子二氨基磷酸二氨基酯亚基间键合组成。Morpholinos不会降解其RNA靶标,而是通过不依赖RNAse H的位阻机制起作用。它们在细胞中是完全稳定的,不受核酸酶切割。要求与目标RNA具有更大的互补性以影响基因表达,Morpholinos干扰未靶向基因的表达远少于依赖RISC或RNase-H活性的典型敲低的广泛脱靶表达变化。

由于其高的mRNA结合亲和力和出色的特异性,Morpholinos产生了可靠且可预测的结果。根据选择的寡核苷酸序列,它们可以阻断细胞质中的翻译起始(通过靶向编码序列的前25个碱基的5'UTR),可以修饰细胞核中的pre-mRNA剪接(通过靶向剪接连接或剪接调控)位点)或可以抑制miRNA的成熟和活性(通过靶向pri-miRNA或成熟的miRNA),以及更奇特的应用,例如核酶抑制,修饰poly-A拖尾阻断RNA易位序列或翻译移码。吗啉在动物中,被证明有效的原生生物植物细菌

我们正在不断开发新型的细胞质递送系统,例如用于培养细胞的“ Endo-Porter ”和用于培养和体内递送的Vivo-Morpholinos借助成熟的递送技术,可以很容易地将吗啉代化合物递送到培养物,胚胎或动物中,这使吗啉代蛋白成为遗传研究和药物靶标验证计划的最佳工具。



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Gene Tools控制寡核苷酸标准品对照: Morpholino标准品对照寡核苷酸以折扣价提供[$ 100/100 nmol],以最大程度地减少反义实验的费用。该标准对照寡核苷酸是25-聚体,具有以下序列:5'-CCT CTT ACC TCA GTT ACA ATT TAT A 3'这种寡聚体应该没有靶点,并且生物学活性应非常低-除了来自在β-珠蛋白前体mRNA的705位具有剪接产生突变的thallasemic人类网织红细胞中。在这些细胞中,这种寡核苷酸将纠正剪接错误,从而产生编码正常β-珠蛋白链的正确剪接的mRNA。但是,在斑马鱼中观察到了模拟注射胚胎的轻微变化;任何单个序列都可能对基因表达产生影响。标准对照是一种广泛使用且经常报告的序列,是一种很好的阴性对照,但并不完美。有关此标准控件寡核苷酸的数量和价格信息,请转到当前价格清单。随机对照:在随机对照25-N 是许多寡核苷酸序列的混合物,是在合成周期的每个步骤中添加活化的吗啉亚基的混合物制成的。理论上,大批随机对照混合物中存在4 ^ 25个不同的序列。在含有1mM吗啉代主链的溶液中,任何一种序列都以极低的浓度存在。自定义阴性对照: 也可以订购自定义序列Morpholino阴性对照寡核苷酸。如果标准或随机对照寡核苷酸不适合用作实验的阴性对照,我们建议使用反义序列的倒数作为阴性对照。这种反义序列的优势是其长度和碱基组成与您的反义寡核苷酸相同。这是一个基于任意反义序列的示例:反义序列:5'-AAC GAA CGA ACG AAC GAA CGA ACG C反转反义:5'-CGC AAG CAA GCA AGC AAG CAA GCA A一个不太理想的阴性对照是有义序列。有时在有义对照中观察到奇数表达调节,例如目的基因的上调(假设是由于DNA相互作用)。反义序列:5'-AAC GAA CGA ACG AAC GAA CGA ACG C有义序列:5'-GCG TTC GTT CGT TCG TTC GTT CGT T自定义特异性对照: 自定义序列Morpholino特异性对照寡核苷酸包括非重叠的反义对照寡核苷酸和五个-控制不当的寡核苷酸。对于严格的特异性研究,我们建议使用第二个不重叠的寡核苷酸,该寡核苷酸靶向与第一个反义寡核苷酸相同的RNA。如果在使用与第一个相同的mRNA的第二个寡核苷酸时概括了敲除的结果,则这支持以下假设:观察到的结果是由于与靶向RNA的相互作用而不是意外的RNA。另一个特异性对照是五错配对寡核苷酸,这是在整个反义早期历史中用于反义研究的一种选择。我们建议您不要将五个错配寡核苷酸用作特异性对照。当使用五对错配寡核苷酸时,有时会出现意想不到的效果。为了最有效地减少与反义寡核苷酸靶RNA的相互作用,错配应该通过五错配对对照寡核苷酸的序列进行分布。反义序列:5'-AAC GAA CGA ACG AAC GAA CGA ACG C5错配对照:5'-AAg GAA gGA ACc AAC GAA CcA AgG C值得注意的是,在利用这种配对错误的对照进行序列特异性的早期研究中,发现吗啉代寡核苷酸可在比相应的硫代磷酸酯寡核苷酸提供的浓度高数百倍的浓度范围内提供高特异性靶标抑制作用


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