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Gene Tools吗啉代反义寡核苷酸Morpholino反义词简介吗啉代寡核苷酸是阻止RNA上的位点阻塞细胞过程的高级工具。Morpholino寡核苷酸特异性结合其选定的靶位点,以阻止细胞组分进入该靶位点。可利用此特性来阻断翻译,阻断剪接,阻断miRNA或其靶标并阻断核酶活性。翻译阻止:通过在空间上阻断翻译起始复合物,Morpholinos可以完全敲低许多靶序列的表达,以至于在等待现有蛋白降解后,靶蛋白条带就会从蛋白质印迹中消失。与许多反义类型(例如siRNA,硫代磷酸酯)不同,吗啉代通常不会引起其RNA靶标的降解。相反,它们会阻断目标RNA的生物活性,直到该RNA自然降解,从而释放出吗啉代。这意味着RT-PCR不适合用于测定Morpholinos的翻译阻断。接头阻塞:通过阻断参与剪接pre-mRNA的位点,Morpholinos可用于修饰和控制正常剪接事件。可以通过RT-PCR方便地测定此活性,成功的剪接修饰表现为电泳凝胶上RT-PCR产物条带的变化。该条带可能会转移到新的质量,或者,如果剪接修饰触发了无义介导的转录物衰减,则野生剪接的条带将失去强度或消失。像所有基因敲除试剂一样,吗啉代蛋白必须主动递送到大多数细胞中。Morpholinos可以通过多种方法传递到培养的细胞中,包括刮擦贴壁细胞,电穿孔甚至显微注射。但是,我们的 Endo-Porter就每细胞递送的吗啉的量,均匀分布于整个细胞群体,递送的可再现性以及在推荐浓度下对大多数细胞类型而言无毒而言,递送试剂通常可在培养的细胞中提供出色的递送。对于动物实验,我们的Vivo-Morpholinos及其附着的递送部分在静脉注射后从血液进入细胞,或进入局部注射后进入组织的细胞;它们也是用于细胞培养物或外植体的最方便的反义寡核苷酸,因为它们不需要任何其他试剂来进行胞质递送。Morpholino寡核苷酸与天然核酸完全不同,亚甲基吗啉环取代了核糖或脱氧核糖部分,非离子二氨基磷酸酯键取代了DNA和RNA的阴离子磷酸盐。每个吗啉环都适当地定位了一个标准的DNA碱基(A,C,G,T)进行配对,从而使25个碱基的吗啉寡核苷酸牢固地并特异性地通过Watson结合到RNA链中互补的25个碱基的靶位点上-克里克配对。由于Morpholino oligo的不带电主链无法被酶识别,因此对核酸酶完全稳定。


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